AAE-MS在提升HCP抗體覆蓋率檢測中的作用檢測技術服務詳情介紹

宿主細胞蛋白（HCP）作為生物制藥中的關鍵工藝相關雜質(zhì)，一直是質(zhì)量控制與注冊申報中的重點。HCP檢測多依賴ELISA，而抗體識別范圍的廣度——即抗體覆蓋率，是決定ELISA方法學有效性的核心因素。在抗-HCP抗體覆蓋率驗證方面，二維Western印跡法（2D-Western Blot）是gōngrèn的“圖譜型金標準”，通過蛋白點數(shù)量對比計算覆蓋率。然而，它僅能告訴我們抗體識別了多少“點”，卻無法回答被識別的是哪些蛋白。這對藥品質(zhì)量風險評估、免疫原性分析和抗體篩選存在天然盲區(qū)。免疫親和富集-增強質(zhì)譜（AAE-MS），正是在此背景下被提出并快速發(fā)展。它將抗體捕獲能力與高分辨質(zhì)譜聯(lián)用，不僅可jīngzhǔn識別抗體實際識別的HCP種類，還可用于量化其豐度，為提升HCP抗體覆蓋率檢測力提供更具深度和分子分辨力的視角。

一、AAE-MS技術原理與流程概覽

1、AAE-MS基本原理

AAE-MS（Affinity-Assisted Enrichment Mass Spectrometry）是一種將抗-HCP抗體偶聯(lián)于固相基質(zhì)上，用于富集目標蛋白，再通過質(zhì)譜進行蛋白鑒定和定量的策略。

2、AAE-MS標準化流程

（1）抗體固定：將待驗證的抗-HCP抗體偶聯(lián)至Protein A/G磁珠或Sepharose樹脂

（2）樣品孵育：與HCP混合樣品充分孵育，使抗體結合其識別蛋白

（3）洗脫與酶解：洗去未結合雜質(zhì)，保留免疫復合物并進行酶解處理

（4）質(zhì)譜分析：使用LC-MS/MS識別富集蛋白的具體種類和豐度

（5）結果分析：比對總HCP蛋白譜，評估抗體“識別種類”與“識別偏好”

二、AAE-MS 在抗體覆蓋率評估中的關鍵優(yōu)勢

1、提供蛋白種類層面的識別信息

二維Western只能看到“多少個蛋白點”，而AAE-MS能夠明確識別出被抗體識別的每一個蛋白ID，包括其功能、分子量、等電點、免疫原性預測等屬性。

2、識別能力不依賴電泳分離效果

2D-WB中弱表達蛋白或位置重疊蛋白可能被漏算，而AAE-MS對低豐度蛋白具有更高的檢測靈敏度，避免點位統(tǒng)計誤差。

3、覆蓋率定量更精細

可輸出：

（1）被識別蛋白數(shù)量 vs 總HCP蛋白數(shù)量

（2）豐度分布圖

（3）被識別蛋白的功能注釋與生物學風險預測

4、識別“盲區(qū)”抗體

可用于發(fā)現(xiàn)哪些高風險HCP未被當前抗體識別，為新抗體設計、補充免疫原策略提供依據(jù)。

三、AAE-MS 在抗-HCP抗體開發(fā)與申報中的應用場景

1、通用 vs 定制抗體對比評估

（1）用于評估商業(yè)通用抗體是否覆蓋項目特定HCP譜

（2）支持多個抗體候選進行覆蓋率排序，為定制開發(fā)決策提供定量依據(jù)

2、補充二維Western驗證結果

（1）二維Western覆蓋率≥70%時，AAE-MS可用于確認識別種類是否覆蓋已知高風險HCP

（2）二維Western覆蓋率偏低時，AAE-MS有助于判斷“識別范圍窄”是否為功能性缺失

3、用于CMC申報的深度佐證

（1）支持提交至FDA/EMA作為“蛋白種類識別”材料

（2）符合 ICH Q6B 對雜質(zhì)“定性+定量+生物風險識別”的要求

AAE-MS的出現(xiàn)，為HCP抗體覆蓋率驗證帶來了質(zhì)的飛躍。相比二維Western圖譜的點位統(tǒng)計，AAE-MS提供了更具深度、分子分辨率和可追溯性的識別信息，幫助生物制藥企業(yè)更科學地評估抗體性能、控制檢測盲區(qū)，并滿足國際注冊要求。百泰派克生物科技已將AAE-MS成功應用于多個mAb、重組蛋白和疫苗項目，協(xié)助客戶實現(xiàn)HCP抗體驗證的定量升級與風險zuì小化，助力藥品質(zhì)量體系更合規(guī)、更可控。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白zhìzǔxué

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白zhìzǔxué分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術優(yōu)良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質(zhì)譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!

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