1.2 RNAi載體構(gòu)建服務(wù)
諾百優(yōu)勢
質(zhì)量保證：針對一個基因的不同位置設(shè)計4條miRNA序列，在轉(zhuǎn)染效率>80%的前提下，我們保證至少2個克隆在mRNA水平
達(dá)到70%以上的Knockdown效率
多種平臺載體可供選擇：shRNA載體，miRNA干擾載體（第二代干擾載體），miR-shRNA載體（第三代干擾載體）
利用綠色熒光蛋白（GFP）和感興趣的RNAi序列協(xié)同表達(dá)，方便追蹤
可將多個RNAi序列串聯(lián)到同一表達(dá)載體中并同時表達(dá)，進(jìn)行多個靶基因的同時干擾
原理
RNA干擾（RNAi）是有效抑制基因表達(dá)以及研究各種細(xì)胞類型中蛋白質(zhì)功能的*方法。相比傳統(tǒng)的短/小干擾RNA（siRNA），
使用載體進(jìn)行RNAi實驗*地擴(kuò)展了實驗的可能性。
采用載體技術(shù)能夠：
實現(xiàn)瞬時或穩(wěn)定的靶標(biāo)抑制
在任何類型的細(xì)胞（甚至是難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞和非分裂細(xì)胞）中執(zhí)行 RNAi
通過誘導(dǎo)型RNAi表達(dá)來調(diào)控基因抑制
選擇穩(wěn)定表達(dá)RNAi序列的純細(xì)胞群
通過組織特異性啟動子控制體內(nèi)基因表達(dá)

我們的RNAi載體構(gòu)建，有以下選擇：

1） shRNA干擾載體構(gòu)建：短發(fā)卡RNA（shRNA）是可以克隆到表達(dá)載體并表達(dá)短的干擾RNA（siRNA，19 - 21個核苷酸的
RNA雙鏈）的DNA分子。我們可根據(jù)靶標(biāo)設(shè)計短發(fā)卡RNA （shRNA）序列并將其克隆入shRNA載體上。
2） miRNA（microRNA）干擾載體構(gòu)建：屬于第二代RNA干擾載體平臺，擁有更高干擾效率和RNA干擾片段設(shè)計成功率。
miR RNAi表達(dá)載體采用Pol II啟動子表達(dá)人工設(shè)計的miRNA，后者從長的轉(zhuǎn)錄本被加工，進(jìn)而導(dǎo)致特異性的mRNA的降解。
3） shRNAmir是用19nt的siRNA序列替代miRNA中的作用序列，保持miRNA的環(huán)和雙臂結(jié)構(gòu)。基于miRNA mir-30或miRNA
mir-155雙臂結(jié)構(gòu)的shRNAmir質(zhì)粒載體RNAi效果更好：shRNAmir是目前效果的RNAi產(chǎn)品形式。
服務(wù)流程
1） 客戶提供：基因的Accession Number
2） 針對特定基因，設(shè)計RNAi序列；合成該序列并退火生成雙鏈DNA
3） 將DNA與RNAi載體相連，連接物轉(zhuǎn)化大腸桿菌
4） 測定全長序列以鑒定序列的正確性；制備甘油菌
5） 提供數(shù)據(jù)分析和報告給客戶
6） 我們提供：構(gòu)建好的RNAi表達(dá)載體和相應(yīng)的甘油菌