凝膠過(guò)濾柱操作注意事項(xiàng)

閱讀：138 發(fā)布時(shí)間：2025-11-27

　　凝膠過(guò)濾柱是一種基于分子大小差異進(jìn)行分離的層析技術(shù)核心工具，也被稱(chēng)為分子篩層析柱或尺寸排阻層析柱(Size Exclusion Chromatography, SEC)。

　　凝膠過(guò)濾柱操作注意事項(xiàng)：

　　層析柱的選擇：

　　理想的層析柱的直徑與長(zhǎng)度之比是1:25~100。當(dāng)用同樣直徑的層析柱分離兩種以上的物質(zhì)時(shí)，長(zhǎng)層析柱比短的分辨率高；當(dāng)用同樣長(zhǎng)度的層析柱分離兩種以上的物質(zhì)時(shí)，層析柱直徑大的比小的分辨率高。

　　裝柱效果：

　　裝柱效果對(duì)凝膠過(guò)濾層析影響很大，應(yīng)該嚴(yán)格按照說(shuō)明要求，使用裝柱裝置裝柱。確保柱床表面平整，無(wú)溝流及氣泡，否則應(yīng)重裝。

　　洗脫條件：

　　洗脫過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，切勿過(guò)快。上樣的體積要小，濃度不宜過(guò)高。加樣及整個(gè)洗脫過(guò)程中，嚴(yán)防柱面變干。

　　緩沖液的選擇：

　　純化過(guò)程必須嚴(yán)格控制緩沖液的pH及離子強(qiáng)度。避免使用對(duì)凝膠或樣品有損害的緩沖液。

　　柱子的保養(yǎng)與保存：

　　凝膠過(guò)濾柱需要注意防止微生物的生長(zhǎng)。被微生物污染后的色譜柱將無(wú)法重現(xiàn)原來(lái)的分離效果與柱效，嚴(yán)重時(shí)會(huì)使凝膠色譜柱報(bào)廢。

　　常用的保存抑菌劑有0.02%疊氮鈉、0.002%洗必泰(hibitane，雙氯苯雙胍己烷)、0.01%~0.02%三氯丁醇、0.1mol/l氫氧化鈉等。

　　值得注意的是溫度不能過(guò)低，以免凍結(jié)。為了不凍結(jié)可以提高保存時(shí)介質(zhì)的離子強(qiáng)度。

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