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    維生素D（vitaminD）為固醇類衍生物，具抗佝僂病作用，又稱抗佝僂病維生素。維生素D家族成員中zui重要的成員是D2和D3。雖然日常膳食可補(bǔ)充部分維生素D，但仍有相當(dāng)一部分人面臨著維生素D攝入不足的問(wèn)題，各種人為添加維生素D的食品便應(yīng)運(yùn)而生。因此，準(zhǔn)確測(cè)定各種食品中的維生素D含量顯得非常重要，科研工作者也一直在努力尋找合適的測(cè)定方法來(lái)得到準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的結(jié)果。

    迪馬科技應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室采用ProElutVDC維生素D2、D3固相萃取柱進(jìn)行前處理凈化，DiamonsilC18(2)液相色譜柱成功實(shí)現(xiàn)米粉中維生素D2、D3的分離、測(cè)定，具有分析結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。

    樣品準(zhǔn)備

    (1)取1g樣品，加入10mL水，充分混勻；

    (2)加入1mL二甲基亞砜、5mL甲醇和20mL正己烷：甲基叔丁基醚=1：2，渦旋混合2min，6000rpm離心2min，收集上清液；

    (3)向下層殘?jiān)幸来渭尤?mL二甲基亞砜、5mL甲醇和10mL正己烷：甲基叔丁基醚=1：2，重復(fù)提取兩次，合并三次提取上清液；

    (4)將上清液在40℃下減壓蒸至近干，待凈化。

    SPE柱凈化——ProElutVDC2g/12mL(Cat.#：65358)

(1)活化：	依次向柱中加入10 mL乙酸乙酯、10 mL正己烷，棄去流出液；
(2)上樣：	再用5 mL正己烷分兩次洗滌旋蒸瓶并加入柱中，棄去流出液；
(3)淋洗：	依次向柱中加入10 mL正己烷、10 mL10%乙酸乙酯正己烷，棄去流出液；
(4)洗脫：	向柱中加入20 mL 10%乙酸乙酯正己烷，收集流出液；
(5)重新溶解：	將洗脫液在40 ℃減壓蒸至近干，用甲醇定容至1 mL，供HPLC分析。

分析條件

色譜柱：	Diamonsil C18(2)，250 mm × 4.6 mm，5 μm（Cat# 99603）
流速：	1.0 mL/min
檢測(cè)器：	UV 264 nm
柱溫：	30 ℃
進(jìn)樣量：	20 μL
流動(dòng)相：	甲醇

添加回收結(jié)果

米粉中維生素D2、D3（添加水平2.0mg/kg）的添加回收結(jié)果

目標(biāo)化合物	維生素D2	維生素D3
回收率(%)	84.69	87.42

維生素D2、D3標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖(2.0mg/L)

米粉中維生素D2、D3(添加水平2.0mg/kg)色譜圖

米粉中維生素D₂、D₃(空白)色譜圖

米粉中維生素D2、D3的檢測(cè)相關(guān)產(chǎn)品信息：

貨號(hào)	名稱	規(guī)格
樣品前處理
65358	維生素D2、D3檢測(cè)柱	2 g/12 mL,20/pk
65358	ProElut VDC	2 g/12 mL,20/pk
244358	12管防交叉污染真空SPE萃取裝置	12位
4806	考克(控制流量)	15/pk
99011	真空/正壓兩用泵，無(wú)油	1/pk
99013	抽濾瓶套裝	1/pk
99013	(包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞)	1/pk
37177	針頭式過(guò)濾器 Nylon	13 mm,0.22 μm 100/pk
37180	針頭式過(guò)濾器 Nylon	13 mm,0.45 μm 100/pk
色譜柱及保護(hù)柱
99603	通用型反相液相色譜柱	250 × 4.6 mm, 5 μm
99603	Diamonsil C18（2）	250 × 4.6 mm, 5 μm
6201	EasyGuard保護(hù)柱套裝	1個(gè)柱套+2個(gè)柱芯
6201	EasyGuard保護(hù)柱套裝	10 × 4.0 mm
標(biāo)準(zhǔn)品
12-N-V17-100MG	維生素D2[50-14-6]	100 mg
12- N-11463-100MG	維生素D3[67-97-0]	100 mg
HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對(duì)試劑
50102	甲醇 HPLC級(jí)	4 L
50104	乙酸乙酯 HPLC級(jí)	4 L
50115	正己烷 HPLC級(jí)	4 L
50119	二甲基亞砜 HPLC級(jí)	4 L
50123	甲基叔丁基醚 HPLC級(jí)	4 L
通用色譜產(chǎn)品
52401B	瓶架/藍(lán)色	50 孔
52401A	瓶架/白色	50孔
5323	樣品瓶（棕色/螺紋）	2 mL, 100/pk
5325	樣品瓶蓋/含墊（已經(jīng)組裝）	100/pk
H80465	HPLC 進(jìn)樣針	25 μL