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實時熒光定量PCR儀的操作步驟是什么

閱讀:849      發(fā)布時間:2025-10-30
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實時熒光定量pcr儀是用于熒光測量的儀器,采用側(cè)邊熒光采集方式,6個熒光通道同時采集,5S內(nèi)可完成96個樣本6個熒光通道的檢測,大大節(jié)約檢測時間。本產(chǎn)品具有強大的軟件及硬件功能,滿足多場景客戶使用需求。
產(chǎn)品特點:
熒光信號強、背景噪聲低,靈敏度高。
5S內(nèi)完成96個樣本所有熒光通道的檢測。
采用LED光源設(shè)計,節(jié)能環(huán)保,使用壽命長,免維護。
自動出倉功能,可與自動化工作站配合使用,工作效率高。
PC端操作,一臺電腦可控制多臺儀器,可隨時運行多組實驗。
軟件分析功能強大,可以進行定性/定量分析、HRM、基因分型等。
實驗前準(zhǔn)備:
‌耗材選擇‌:根據(jù)儀器型號選擇適配的八連管、96孔板或384孔板,需提前確認儀器配置‌。
‌試劑準(zhǔn)備‌:將qPCR預(yù)混液、模板DNA、引物、無酶水等試劑置于冰盒上,并放入生物安全柜中‌。
‌儀器檢查‌:開機后輸入密碼,待自檢完成(指示燈變綠)后啟動軟件‌。
反應(yīng)體系配置:
‌混合試劑‌:按說明書計算用量,將預(yù)混液、無酶水、引物加入Ep管中,顛倒混勻‌。
‌加樣‌:將混合液加入八連管左側(cè)兩列,模板加入右側(cè),每種濃度設(shè)兩個平行‌。
‌離心‌:蓋緊管蓋后瞬時離心,確保溶液混合均勻‌。
儀器上機操作:
‌裝載樣本‌:彈出儀器托架,將八連管或96孔板放入(八連管需適配器),注意對稱平衡放置‌。
‌設(shè)置程序‌:
選擇實驗類型(如SYBR Green)‌。
設(shè)置溫度程序(如預(yù)變性95℃ 30s,擴增階段95℃ 5s、60℃ 30s,循環(huán)40次)‌。
確認熱蓋溫度、反應(yīng)體系體積(如20μL)‌。
‌啟動運行‌:保存程序后開始實驗,過程中勿拉動反應(yīng)艙‌。
結(jié)果分析:
‌數(shù)據(jù)采集‌:程序結(jié)束后自動生成擴增曲線和熔解曲線,需檢查曲線是否平滑、復(fù)孔結(jié)果是否均一‌。
‌閾值調(diào)整‌:若為定性實驗(如病毒檢測),需設(shè)置陰性/陽性對照,并手動調(diào)整閾值以提高準(zhǔn)確性‌。
 
 

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