谷*甘肽過氧化物酶活性檢測試劑盒

谷*甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1190
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前取一瓶加入1.65mL蒸餾水溶解，2-8℃可保存2周；

2. 試劑一工作液：臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一：稀釋液=1:1的比例進行配制，現(xiàn)用現(xiàn)配；

3. 試劑二工作液：液體放于試劑瓶內(nèi)EP管中，使用前先離心。臨用前按2 μL試劑二：10 mL蒸餾水的比例稀釋試劑二，現(xiàn)用現(xiàn)配；

4. 試劑三：瓶底若有結晶可50℃水浴溶解，此溶液為飽和溶液，若底部最終還有結晶，吸取上清使用即可；

5. 試劑四：若試劑有析出可40℃加熱溶解，也可震蕩促進溶解；

6. 標準品：10 mg還原型谷*甘肽。臨用前加入0.405 mL蒸餾水溶解為80 μmol/mL的標準溶液備用，2-8℃可保存4周。

產(chǎn)品說明：
谷*甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px或GPX，EC.1.11.1.9）是機體內(nèi)廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶。GPX能夠催化還原型谷*甘肽（GSH）生成氧化型谷*甘肽（*），使有毒的過氧化氫還原成無毒的羥基化合物。

GPX催化H₂O₂氧化GSH，產(chǎn)生*，GSH能與DTNB生成在412nm處有特征吸收峰的化合物，412nm下吸光度的下降即可反應GPX的活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。  
需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、天平、臺式離心機、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/超聲破碎儀、EP管。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

實驗實例：

1. 取0.1 g小鼠肝臟組織加入1 mL提取液進行勻漿研磨，取上清稀釋40倍后再按照測定步驟操作，用玻璃比色皿測得A測定管=0.108，A對照管=0.303，A標準管=0.491，A空白管=0.033，計算?A測定=A對照管-A測定管=0.195，?A標準= A標準管-A空白管=0.458，按樣本質量計算酶活得：

GPX (U/g 質量)=200×ΔA測定÷ΔA標準÷W×40（稀釋倍數(shù)）=34061 U/g。

1. 取0.1 g楊樹葉片加入1 mL提取液進行勻漿研磨，用玻璃比色皿測得A測定管=0.220，A對照管=0.318，A標準管=0.491，A空白管=0.033，計算?A測定=A對照管-A測定管=0.098，?A標準=A標準管-A空白管=0.458，按樣本質量計算酶活得：

GPX (U/g 質量)=200×ΔA測定÷ΔA標準÷W=428 U/g。
相關發(fā)表文獻：

1. Yang Yang,Li Jing,Wei Cong,et al. Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice. Phytomedicine. June 2019; 59.(IF4.18)

2. Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,et al. Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model. Journal of Functional Foods. June 2018;(IF3.197)

3. Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen,et al. Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development. Toxicological & Environmental Chemistry. Feb 2019;(IF3.547)

4. Wang H, Li Y Y, Qiu L Y, et al. Involvement of DJ1 in ischemic preconditioninginduced delayed cardioprotection in vivo[J]. Molecular medicine reports,  2017, 15(2): 995-1001

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