細(xì)胞會(huì)在細(xì)胞外環(huán)境中釋放不同類型的膜源性囊泡。這些膜源性囊泡被稱為胞外囊泡（EV），包括外泌體和微泡體。外泌體是相對(duì)較小的胞外囊泡（30-150nm），可在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì)、酶和脂質(zhì)等生物大分子，是細(xì)胞間通訊的重要模式。此外，它們可以用作各種疾病的生物標(biāo)志物，也可以作為下一代治療劑的天然藥物遞送載體系統(tǒng)。
在本文中，我們描述了一種通過(guò)結(jié)合高速和超速離心機(jī)從脂肪源性干細(xì)胞中快速、簡(jiǎn)單地分離外泌體的方法。細(xì)胞在BioBLU® 0.3c 一次性生物反應(yīng)罐中培養(yǎng)，并由 DASbox®迷你生物反應(yīng)器系統(tǒng)控制。DASbox 迷你生物反應(yīng)器系統(tǒng)可以培養(yǎng)大量干細(xì)胞，從而獲得高產(chǎn)量的外泌體。隨后，我們使用 CR22N 離心機(jī)對(duì)條件培養(yǎng)基進(jìn)行了清除。這是一臺(tái)高速離心機(jī)，RCF 高達(dá) 32,300 x g。在本文，我們使用了可同時(shí)容納 10 x 50 mL 和 10 x 15 mL 錐底管的 R15A 固定角轉(zhuǎn)。為了進(jìn)一步濃縮外泌體，我們使用了最大 RCF 為803,000 x g 的 CP100NX 超速離心機(jī)以及能夠容納6 x 40 mL 離心管的 P32ST 水平轉(zhuǎn)子。此外，相比于不使用蔗糖墊液的對(duì)照組，通過(guò)在超速離心步驟中使用蔗糖墊液，可以快速分離出純凈均一的外泌體。在整個(gè)離心過(guò)程中，我們都使用了大容量轉(zhuǎn)子，從而減少了重復(fù)的離心步驟，并將外泌體分離時(shí)間縮短到 4 小時(shí)以內(nèi)，快于沉淀或過(guò)濾等其他分離方法。
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