人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3試劑盒
人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3試劑盒是采用標(biāo)準(zhǔn)化酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)研發(fā)的科研用檢測(cè)試劑盒，可精準(zhǔn)檢測(cè)人類生物樣本中蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3（PDIA3）濃度，廣泛應(yīng)用于PDIA3功能研究、人類蛋白質(zhì)折疊調(diào)控、氧化應(yīng)激反應(yīng)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及相關(guān)疾病（如腫瘤、自身免疫病、神經(jīng)退行性疾?。┫嚓P(guān)生命科學(xué)基礎(chǔ)研究場(chǎng)景。蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3是人類體內(nèi)一類關(guān)鍵的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)駐留蛋白，屬于蛋白二硫化物異構(gòu)酶家族，主要分布于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，同時(shí)可在細(xì)胞表面、細(xì)胞質(zhì)及體液中少量表達(dá)，參與調(diào)控蛋白質(zhì)二硫鍵的形成、異構(gòu)化及折疊過程，維持蛋白質(zhì)正確構(gòu)象，同時(shí)參與氧化還原平衡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控及細(xì)胞凋亡等生理過程，其表達(dá)異常與腫瘤發(fā)生發(fā)展、自身免疫性疾病、神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病等密切相關(guān)，相關(guān)濃度檢測(cè)對(duì)人類相關(guān)科研、相關(guān)疾病療法研發(fā)及PDIA3靶向藥物篩選具有重要意義[1][2][6]。本試劑盒采用高度特異性的雙抗體夾心原理，可快速、精準(zhǔn)檢測(cè)人類相關(guān)樣本中的PDIA3濃度，操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)，無交叉干擾，適用于科研領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究、蛋白調(diào)控及疾病相關(guān)科研檢測(cè)，為相關(guān)科研及藥物研發(fā)提供可靠的檢測(cè)工具，各組分均經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量管控，附帶質(zhì)控證書（COA），保障檢測(cè)結(jié)果的可靠性，適配人類樣本常規(guī)檢測(cè)體系需求。
檢測(cè)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（Double Antibody Sandwich ELISA）設(shè)計(jì)而成，該方法是定量檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白類靶標(biāo)的金標(biāo)準(zhǔn)，具有高靈敏度、強(qiáng)特異性的優(yōu)勢(shì)[3][5]。將特異性抗PDIA3單克隆抗體包被于酶標(biāo)板孔內(nèi)，形成固相抗體；向板孔中加入待檢測(cè)樣本（或校準(zhǔn)品），樣本中存在的PDIA3會(huì)與固相抗體特異性結(jié)合，形成抗體-抗原復(fù)合物；洗滌去除未結(jié)合的雜蛋白后，加入酶標(biāo)記的該蛋白特異性二抗，該二抗與抗體-抗原復(fù)合物特異性結(jié)合，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)二抗的三明治復(fù)合物；再次洗滌去除未結(jié)合的酶標(biāo)二抗，加入TMB顯色底物，酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，顯色強(qiáng)度與樣本中PDIA3的濃度呈正相關(guān)[3][7]；加入終止液終止反應(yīng)后，在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過校準(zhǔn)品建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可計(jì)算出樣本中的具體濃度，檢測(cè)范圍可達(dá)到0.156-10ng/mL，靈敏度可達(dá)pg/mL級(jí)別，滿足人類PDIA3相關(guān)常規(guī)科研及藥物研發(fā)檢測(cè)需求，可精準(zhǔn)捕捉低濃度PDIA3的表達(dá)變化，適配肝細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、血清、組織勻漿等樣本的微量檢測(cè)[1][2]。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 特異性高：采用高特異性的PDIA3單克隆抗體，可精準(zhǔn)識(shí)別人類樣本中的目標(biāo)蛋白，與人類體內(nèi)其他蛋白二硫化物異構(gòu)酶家族成員（如PDIA1、PDIA2）、雜蛋白、細(xì)胞因子及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)，有效避免假陽(yáng)性、假陰性結(jié)果，保障檢測(cè)準(zhǔn)確性，符合嚴(yán)格的性能標(biāo)準(zhǔn)，適配相關(guān)檢測(cè)需求，可特異性識(shí)別活性狀態(tài)的PDIA3分子，排除降解產(chǎn)物及類似功能蛋白干擾[2][6]；
2. 靈敏度高：檢測(cè)限可達(dá)pg/mL級(jí)別，可精準(zhǔn)檢測(cè)樣本中低濃度的PDIA3，滿足人類蛋白質(zhì)折疊異常早期、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激初期、腫瘤發(fā)生早期等低表達(dá)場(chǎng)景的實(shí)驗(yàn)需求，適配這類低表達(dá)場(chǎng)景的微量檢測(cè)，助力蛋白調(diào)控、氧化應(yīng)激及疾病相關(guān)科研早期探究，可精準(zhǔn)捕捉PDIA3在蛋白折疊、氧化還原調(diào)控過程中的濃度變化[1][6]；
3. 操作簡(jiǎn)便：試劑盒包含所有檢測(cè)所需試劑（包被板、校準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、終止液、洗滌液等），無需額外配制核心試劑，步驟清晰，全程可在2-3小時(shí)內(nèi)完成，適配常規(guī)實(shí)驗(yàn)室及科研檢測(cè)操作，試劑外觀整潔，緩沖液為透明溶液，無沉淀或絮狀物，適配人類各類樣本檢測(cè)需求，貼合科研常規(guī)操作場(chǎng)景[7]；
4. 重復(fù)性好：嚴(yán)格的生產(chǎn)質(zhì)量控制體系，確保不同批次、同批次內(nèi)試劑盒的檢測(cè)結(jié)果一致性，變異系數(shù)（CV）低，保障相關(guān)實(shí)驗(yàn)及科研檢測(cè)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性和穩(wěn)定性，每批次均經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控驗(yàn)證，適配人類樣本的批量檢測(cè)，助力蛋白調(diào)控及疾病相關(guān)規(guī)?；蒲屑皺z測(cè)[3][7]；
5. 適用范圍廣：可適配人類血清、血漿、組織勻漿（肝臟、腎臟、腫瘤組織等）、細(xì)胞裂解液（肝細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞等）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等多種樣本類型，無需復(fù)雜前處理，適配相關(guān)科研、蛋白折疊探究、氧化應(yīng)激研究及PDIA3靶向藥物篩選等檢測(cè)場(chǎng)景，可用于PDIA3表達(dá)調(diào)控、蛋白功能評(píng)價(jià)、疾病狀態(tài)檢測(cè)、藥物作用效果檢測(cè)等相關(guān)基礎(chǔ)研究及科研應(yīng)用，可滿足人類不同組織、細(xì)胞及體液樣本的多樣化檢測(cè)需求[1][2][6][7]；
6. 穩(wěn)定性強(qiáng)：試劑盒各組分經(jīng)特殊工藝處理，冷藏保存下活性穩(wěn)定，有效期長(zhǎng)，開封后可按要求短期保存，降低試劑浪費(fèi)，且試劑批間差異小，保障檢測(cè)結(jié)果的一致性，符合體外檢測(cè)試劑相關(guān)規(guī)范，適配人類樣本長(zhǎng)期儲(chǔ)存、批量檢測(cè)需求，適配PDIA3樣本（尤其腫瘤組織、肝細(xì)胞樣本）凍存、復(fù)蘇后的檢測(cè)穩(wěn)定性要求[7]。
適用樣本類型
本試劑盒適用于檢測(cè)人類相關(guān)生物樣本中PDIA3濃度，結(jié)合人類樣本的采集特性及PDIA3的表達(dá)分布（主要分布于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，同時(shí)可在細(xì)胞表面、細(xì)胞質(zhì)及體液中少量表達(dá)，廣泛存在于肝臟、腎臟、腫瘤組織、免疫細(xì)胞等），具體適用樣本類型包括：人類血清、血漿、組織勻漿（肝臟、腎臟、腫瘤組織等）、細(xì)胞裂解液（肝細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞等）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液。
備注：（具體樣本處理方法請(qǐng)參考產(chǎn)品說明書），不同樣本類型的處理流程、稀釋比例需嚴(yán)格遵循說明書要求，避免樣本處理不當(dāng)影響檢測(cè)結(jié)果；人類細(xì)胞培養(yǎng)上清液、各類組織勻漿采集后需及時(shí)離心去除細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，避免干擾，采集時(shí)需確保細(xì)胞/組織處于正常生理狀態(tài)，保障PDIA3含量穩(wěn)定；細(xì)胞裂解液、各類組織勻漿制備需加入對(duì)應(yīng)工作濃度的蛋白酶抑制劑，避免PDIA3降解，防止靶標(biāo)蛋白失活；血清、血漿樣本采集后需及時(shí)離心處理，冷藏保存，盡快檢測(cè)，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致PDIA3降解，適配科研樣本的采集與保存需求[7]。
儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)
（一）儲(chǔ)存條件
1. 未開封試劑盒：常規(guī)儲(chǔ)存于2℃~8℃冷藏環(huán)境，避光、密封保存；嚴(yán)禁冷凍，避免低溫導(dǎo)致抗原、抗體變性，影響試劑活性，尤其避免該蛋白相關(guān)檢測(cè)試劑失活，保障試劑適配人類樣本（含腫瘤組織、肝細(xì)胞樣本）凍存、復(fù)蘇后的檢測(cè)需求[7]；
2. 開封后試劑：包被板拆封后，剩余板條需密封保存于2℃~8℃，放入密封袋并加入干燥劑，避免受潮、污染；酶結(jié)合物、顯色底物等開封后需避光冷藏，盡快使用，一般建議1周內(nèi)用完；校準(zhǔn)品復(fù)溶后建議當(dāng)天使用，未用完部分需丟棄，不可再次保存，校準(zhǔn)品凍干粉需用附帶緩沖液溶解，具體操作參考質(zhì)控證書，確保檢測(cè)結(jié)果與人類樣本檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)一致[7]；
3. 儲(chǔ)存環(huán)境：需保持干燥、通風(fēng)，濕度控制在40%~60%，避免陽(yáng)光直射、高溫、潮濕環(huán)境，嚴(yán)禁與腐蝕性、揮發(fā)性試劑混放，防止試劑失活或污染，保障檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，適配常規(guī)科研實(shí)驗(yàn)室儲(chǔ)存條件[7]。
（二）注意事項(xiàng)
1. 試劑盒使用前需提前從冷藏環(huán)境中取出，平衡至室溫（20℃~25℃），平衡時(shí)間不少于30分鐘，避免溫度驟變影響試劑活性及檢測(cè)結(jié)果，尤其適配人類樣本的檢測(cè)穩(wěn)定性；同時(shí)需注意與人類細(xì)胞培養(yǎng)溫度（37℃常規(guī)培養(yǎng)）、腫瘤組織/肝細(xì)胞提取實(shí)驗(yàn)溫度做好銜接，避免樣本溫度波動(dòng)，貼合人類蛋白調(diào)控及疾病科研實(shí)驗(yàn)特性[1][2]；
2. 所有試劑需嚴(yán)格按照說明書規(guī)定的比例稀釋、使用，不可隨意更改試劑用量或反應(yīng)時(shí)間，確保檢測(cè)條件一致；稀釋后的試劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致活性下降，保障抗體與PDIA3的特異性結(jié)合效率，符合ELISA實(shí)驗(yàn)的規(guī)范操作要求[3][5][6]；
3. 實(shí)驗(yàn)所用器具（EP管、吸頭、酶標(biāo)板等）需保持潔凈，一次性器具嚴(yán)禁重復(fù)使用，可重復(fù)使用器具需清洗、滅菌，避免交叉污染；酶標(biāo)板需輕拿輕放，避免板孔破損、劃痕影響檢測(cè)，人類樣本（尤其腫瘤組織、肝細(xì)胞樣本）檢測(cè)所用器具需額外注意無菌處理和低溫操作，防止細(xì)胞污染及PDIA3失活，保障實(shí)驗(yàn)及檢測(cè)的準(zhǔn)確性[7]；
4. 洗滌過程需充分，每步洗滌后需將酶標(biāo)板倒置拍干，避免未結(jié)合的試劑殘留，影響顯色結(jié)果；顯色反應(yīng)需避光進(jìn)行，終止液加入后需立即測(cè)定吸光度，避免顯色過度導(dǎo)致結(jié)果偏差，嚴(yán)格遵循ELISA實(shí)驗(yàn)的操作規(guī)范，確保檢測(cè)精度[3][5][7]；
5. 樣本需新鮮采集、妥善保存，避免反復(fù)凍融，若不能及時(shí)檢測(cè)，人類細(xì)胞裂解液、各類組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液需按說明書要求分裝冷凍保存（-80℃），血清、血漿樣本可分裝冷凍保存（-20℃），檢測(cè)前緩慢融化并離心去除沉淀物，避免渾濁樣本用于檢測(cè)，貼合人類樣本及蛋白調(diào)控相關(guān)組織樣本的凍存保存要求[7]；
6. 實(shí)驗(yàn)過程中需做好個(gè)人防護(hù)，避免試劑接觸皮膚、黏膜，若發(fā)生接觸，需立即用大量清水沖洗；TMB顯色底物具有潛在刺激性，操作時(shí)需佩戴手套、口罩；同時(shí)注意人類細(xì)胞、組織及各類組織勻漿等生物樣本的生物安全防護(hù)，避免樣本泄露污染，符合科研生物安全規(guī)范[7]；
7. 試劑盒過期后嚴(yán)禁使用，所有廢棄試劑、樣本需按生物安全規(guī)范妥善處理，不可隨意丟棄；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，所有接觸試劑的器具需清洗、滅菌后處理；本產(chǎn)品僅用于科研及相關(guān)科研檢測(cè)用途，不適用于人體治療及臨床診斷用途，適配人類科研用樣本的使用權(quán)限要求[1][2][6]。
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以上信息僅供參考，具體請(qǐng)已產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。
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