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elisa試劑盒的制備流程
閱讀：2651 發(fā)布時(shí)間：2013-8-14elisa試劑盒的制備流程一:
酶標(biāo)抗體 （酶標(biāo)抗體制備技術(shù)基本要求是將酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合既不改變抗體的免疫反應(yīng)活性，也不影響酶的生物化學(xué)活性。用于標(biāo)記抗體的酶較多，常用的有辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化物酶和β-半乳糖苷酶等。） 或抗抗體（抗免疫球蛋白）結(jié)合物可采用戊二醛法或過(guò)碘酸鹽氧化法制備。郭春祥建立的辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記抗體的改良過(guò)碘酸鈉法簡(jiǎn)單易行，標(biāo)記效果好，特別適用于實(shí)驗(yàn)室的小批量制備?，F(xiàn)將操作方法介紹如下：
（一） 結(jié)合物的標(biāo)記將5mg HRP溶于05ml蒸餾水中，加入新配制的006mol/L NaIO4水溶液05ml，混勻，置冰箱30min，取出加入016mol/L乙醇水溶液05ml，室溫放置30min后，加入含5mg純化抗體的水溶液（或PBS）1ml，混勻并裝透析袋，以005mol/L、pH值95碳酸鹽緩沖液緩慢攪拌透析6h使之結(jié)合，然后吸出加NaBH4溶液（5mg/ml）02ml，置冰箱2h。
（二） 將上述結(jié)合物混合液加入等體積飽和硫酸銨，冰箱放置30min，離心，將所得沉淀物溶于少許002mol/L、pH值74 PBS中，并對(duì)之透析。次日再離心除去不溶物，即得酶抗體結(jié)合物。用002mol/L、pH值74 PBS加至5ml，進(jìn)行測(cè)定后，冷凍干燥或低溫保存。
（三） 結(jié)合物稀釋度的測(cè)定
ELISA試劑盒用酶結(jié)合物中抗體相應(yīng)的抗原直接包被聚苯乙烯反應(yīng)板，采用ELISA直接法測(cè)定酶結(jié)合物效價(jià)。通常本法制備的酶結(jié)合物作1∶10 000稀釋時(shí)，其OD403仍在01以上。
elisa試劑盒的制備流程二：
ELISA試劑盒 結(jié)合物中辣根過(guò)氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）與抗體量的測(cè)定酶標(biāo)結(jié)合物于751型分光光度計(jì)上分別用280及403nm波長(zhǎng)測(cè)定其光密度（OD），并計(jì)算出OD403與OD280之比值以及HRP與抗體的mol/L比。
結(jié)合物中HRP濃度（mg/ml）=OD403×04
結(jié)合物中IgG濃度（mg/ml）=（OD280-OD403×03）×062
酶/抗體mol/L比=HRP濃度IgG濃度×4
ELISA試劑盒因此，免疫酶技術(shù)是一項(xiàng)定位、定性和定量（敏感度可達(dá)每毫升ng~pg水平）的綜合技術(shù)。常用的酶是辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）和堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）。
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