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Online SPE-二維液相色譜搞定維生素 A/D/E 同時(shí)檢測(cè)
維生素是嬰幼兒配方奶粉中的必需營(yíng)養(yǎng)成分，對(duì)嬰兒生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要。依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB 10765-2021 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒配方食品》和《GB 10766-2021 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 較大嬰兒配方食品》等的規(guī)定，嬰幼兒配方奶粉中必須添加14種維生素，其中包括脂溶性維生素A、D、E。維生素A具有支持視力發(fā)育（如預(yù)防夜盲癥）和免疫系統(tǒng)完善的功效；維生素D可促進(jìn)鈣吸收，強(qiáng)化骨骼發(fā)育；維生素E又名生育酚，是 α、β、γ 和 δ-生育酚等脂溶性維生素的總稱，具有抗氧化作用，可保護(hù)細(xì)胞免受損傷。
本報(bào)告參考《T/SHFCA 002-2024 特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中維生素A、D、E的測(cè)定 在線固相萃取-二維液相色譜法》，采用在線固相萃取方法，使用悟空K2025二維液相色譜系統(tǒng)，同時(shí)測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中維生素A、D、E的含量。該方法摒棄了復(fù)雜的樣品前處理步驟，在保證分析結(jié)果準(zhǔn)確性的前提下，顯著優(yōu)化了樣品分析流程，大幅提升了樣品分析效率。
實(shí)驗(yàn)原理
試樣經(jīng)皂化后，皂化液經(jīng)離心、過濾后注入二維液相色譜系統(tǒng)；試樣通過在線固相萃取柱濃縮凈化后，經(jīng)一維色譜柱分離維生素A和維生素E（α、β、γ 和 δ-生育酚）；再通過中心切割，維生素D經(jīng)閥切換、捕集后由二維色譜柱分離為維生素D2和D3。通過保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。
儀器配置與色譜條件
圖1 悟空K2025二維液相色譜系統(tǒng)
圖2 在線固相萃取-二維高效液相色譜法同時(shí)分析VA、VD、VE閥切換示意圖
表1 二維液相系統(tǒng)色譜條件
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖3 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6針疊加色譜圖
注：1：VA；2：δ-VE；3：β-VE；4：γ-VE；5：α-VE；6：VD2；7：VD3
對(duì)VA、VD、VE混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)試及重復(fù)性考察（圖3），三種維生素均具有極佳的峰形；如表2所示，β-VE和γ-VE的分離度為1.76，VD2和VD3的分離度為2.35，均可實(shí)現(xiàn)良好分離。如表3所示，三種維生素保留時(shí)間RSD均≤0.09 %，峰面積的RSD均≤0.72 %，具有良好的定性定量重復(fù)性。
標(biāo)準(zhǔn)品的VA、VD、VE在其線性濃度范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R均≥0.9999。
圖4 嬰幼兒配方奶粉樣品一維和二維色譜圖
注：1：VA；2：δ-VE；3：β-VE；4：γ-VE；5：α-VE；6：VD2；7：VD3
嬰幼兒配方奶粉試樣中VA、VD、VE的含量范圍為0.0 mg/100g~10 mg/100g；兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差范圍為-0.85 %~4.58 %，滿足《T/SHFCA 002-2024 特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中維生素A、D、E的測(cè)定 在線固相萃取-二維液相色譜法》中規(guī)定的在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算數(shù)平均值的15%的要求；加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)中， VA、VD、VE的回收率范圍為98.0 %~106.0 %。
方法優(yōu)勢(shì)
高效，高通量
本方法通過閥切換實(shí)現(xiàn)皂化液直接進(jìn)樣凈化，省去傳統(tǒng)前處理的提取、凈化、濃縮等繁瑣步驟，大幅節(jié)省前處理時(shí)間，顯著提升工作效率。
安全，成本低
無需大量使用有機(jī)試劑，一方面避免了有毒害試劑對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的健康危害，降低實(shí)驗(yàn)操作風(fēng)險(xiǎn)；另一方面有效降低實(shí)驗(yàn)成本，符合綠色實(shí)驗(yàn)的需求。
自動(dòng)，性能優(yōu)
采用閥切換技術(shù)，自動(dòng)化程度大幅提高，減少人工操作誤差；同時(shí)方法重現(xiàn)性好，且在國(guó)標(biāo)方法規(guī)定的檢測(cè)低限濃度下，所有目標(biāo)物質(zhì)（維生素 A、D、E）均有良好響應(yīng)，具備出色的檢測(cè)靈敏度，能穩(wěn)定可靠地完成測(cè)定。
注意事項(xiàng)
樣品前處理過程中，滴加氫氧化鉀溶液時(shí)需邊加邊振搖，避免局部過熱；整個(gè)前處理過程需要盡快完成，避免試樣長(zhǎng)期暴露在空氣中；
整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程盡量減少光照，樣品須在低溫條件下保存；
VA、VD、VE標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制后，可置于-20 ℃避光保存1個(gè)月。