細(xì)胞培養(yǎng)板的加樣和操作：細(xì)胞培養(yǎng)板在進(jìn)行細(xì)胞操作時同樣遵循嚴(yán)格無菌的原則，各項操作要保證規(guī)范、科學(xué)，不對細(xì)胞的生長造成額外的影響。這其中最常見的問題就是如何保證加樣后細(xì)胞的均勻和盡量減少換液對細(xì)胞生長狀態(tài)的影響。

　　問：96，24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿的蓋子都很松，這樣是方便了透氣，但是細(xì)菌、霉菌等污染物會不會也隨著溜進(jìn)去呢？

　　答：1.蓋子很松，屬于半開放培養(yǎng)，這樣的目的是透氣(實際上是為了使培養(yǎng)皿外的co2能夠與培養(yǎng)皿充分交換，維持培養(yǎng)基的pH值)。

　　2.凡事有利必有弊，這樣當(dāng)然增加了污染的可能性。此外這樣還會使培養(yǎng)皿內(nèi)的液體蒸發(fā)，這對于精確定量的藥物來說就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的a培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須清潔(定期紫外線照，酒精擦洗，盡量少開關(guān)培養(yǎng)箱)b培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度必須始終保持為100%(培養(yǎng)箱內(nèi)放置無菌蒸餾水的水槽)。

　　就好像培養(yǎng)皿，也是一個蓋倒扣的容器，也不會污染。主要是因為蓋子“L”型邊緣產(chǎn)生氣流負(fù)壓的緣故，灰塵上面才附著有微生物，而氣流攜帶的灰塵是無法通過產(chǎn)生負(fù)壓的蓋邊緣的。而透氣作用只是通過空氣的擴散，不會產(chǎn)生氣流，所以只會透氣不會透菌。

　　我使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超凈臺內(nèi))，而其它孔中還有細(xì)胞要培養(yǎng).我很擔(dān)心這樣會污染，不知道要注意什么？大家不知道有什么好的建議。

　　在超凈臺內(nèi)如果操作規(guī)范的話應(yīng)該可以的，我想你可以充分利用培養(yǎng)版的蓋子，盡量只暴露要操作的孔，將其它孔用蓋子蓋起來。這是我的一點粗淺的見解，拋磚引玉吧!

　　使用前綜合考慮一下，充分使用所以的孔;如果只需要使用少數(shù)的孔可以只用一邊的，其余用蓋子蓋住，我習(xí)慣于先用右側(cè)的孔(右手加樣方便)。

　　其實自己感覺只要注意無菌操作，一般是不會污染的。操作時用幾塊玻片把板子一側(cè)墊高，不要把蓋子全打開，一般沒問題。