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目錄:愛必信(上海)生物科技有限公司>>分子生物學>>分子克隆>> abs60371SfiI

SfiI

  • SfiI
參考價 280
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準
280
≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 absin
  • 型號 abs60371
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

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>

更新時間:2025-09-23 21:48:38瀏覽次數:2972評價

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CAS - 純度 -
分子量 - 分子式 -
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T
貨號 abs60371 應用領域 化工,生物產業(yè),綜合
主要用途 -
SfiI 快速內切酶是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶,適用于質粒 DNA、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有快速內切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有優(yōu)良的活性,能夠在 5~15 分鐘內完成酶切。
產品描述
描述

SfiI 快速內切酶是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶,適用于質粒 DNA、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有快速內切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有優(yōu)良的活性,能夠在 5~15 分鐘內完成酶切。此外,去磷酸化、連接試劑在 CutOne Buffer 中均具有 100% 活性,支持一管化反應,提升“酶切 - 修飾 - 連接"的體驗。CutOne Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料,可將產物直接用于凝膠電泳。CutOne Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近;黃色染料與 10 bp雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。


識別位點:
5'...G G C C N N N N ↓ N G G C C...3'
3'...C C G G N ↑ N N N N C C G G...5'


建議反應條件:
1× CutOne™ 緩沖液;
50℃溫育;
參照“DNA 快速酶切流程"配制反應體系。


失活條件:
不可熱失活,請使用酚氯仿抽提或柱純化。


產品組成:

組分規(guī)格
SfiI100 μl
10× CutOne Buffer1 ml
10× CutOne Color Buffer1 ml
使用方法
使用方法
1、DNA 快速酶切流程
(1)在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系:
組分質粒 DNAPCR 產物基因組 DNA
ddH2O15ul16ul30ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer2ul3ula5ul
底物 DNA2ul (up to 1ug)10ul (~0.2ug)10ul (5ug)
SfiI1ul1ul5ul
Total20ul30ul50ul

a. 本體系適用于經過純化的 PCR 產物酶切。未純化的 PCR 產物具備一定的離子強度,10× Cutone Buffer 加入量可適當減少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同時具有外切酶活性,會影響酶切產物,因此如下一步需進行(2)輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時離心以收集掛壁液滴;
(3)50℃溫育 15 min(質粒),或 15~30 min(PCR 產物),或 30~60 min(基因組 DNA);
(4)酚氯仿抽提或柱純化(可選);

(5) 如果使用 CutOne Color Buffer 進行酶切反應,得到的產物可以直接進行上樣電泳。


2、雙酶切或多酶切
(1)每種快速內切酶的用量為 1 μl,并根據需要適當擴大反應體系;
(2) 所有快速內切酶的體積總和不得超過總反應體系的 1/10;

(3)如果所用的幾種快速內切酶的最適反應溫度不同,應先以最適溫度低的酶開始酶切,再添加最適溫度較高的酶,在其最適反應溫度下進行酶切反應。


3、適用于質粒的擴大反應體系
DNA1ug2ug3ug4ug5ug
SfiI1ul2ul3ul4ul5ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer2ul2ul3ul4ul5ul
Total20ul20ul30ul40ul50ul
不同 DNA 中的酶切位點數量
λDNAΦX174pBR322pUC57pUC18/19SV40M13mp18/19Adeno2
00000103

甲基化修飾影響

DamDcmCpGEcoKIEcoBI
無影響剪切受影響剪切受影響無影響無影響

在不同反應緩沖液中的活性


CutOne Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性100%100%100%100%
儲存/保存方法
-20°C 及以下運輸及保存,長期保存建議放 80°C 。有效期2年。
技術指標
質量控制:
功能活性檢測:
50℃下,在 20 μl 通用 CutOne 反應體系中,1 μl SfiI 能夠在 15 min 內消化 1 μg pEPE DNA。
超長時間溫育檢測:
50℃下,在 20 μl 通用 CutOne 反應體系中,將 1 μl SfiI 與 1 μg pEPE DNA 共同溫育 3 h,未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解。更長時間酶切可能出現(xiàn)星號活性。
酶切 - 連接 - 再酶切檢測:
50℃下,使用 10 倍酶量的 SfiI 消化 DNA 底物,回收酶切產物,在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將超過 95%的酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后,使用相同的內切酶可以重新切開 95% 以上的連接產物。
非特異性內切酶活性檢測:
50℃下,在 20 μl 通用 CutOne 反應體系中將 1 μl SfiI 與 1 μg 超螺旋質粒 DNA 共同溫育 4 h 后,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,少于 10% 的質粒 DNA 轉變成缺刻或線性狀態(tài)。
溫馨提示:本產品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究

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