蛋白抽提試劑盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一種比較簡單、方便的從培養(yǎng)細胞或新鮮組織中抽提細胞核蛋白、細胞漿蛋白、細胞膜蛋白與細胞骨架蛋白的方法。約90分鐘就可以完成培養(yǎng)細胞的細胞漿蛋白、細胞核蛋白、細胞膜蛋白與細胞骨架蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，報告基因檢測以及酶活力測定等后續(xù)操作。

1.1準備溶液

1.1.1室溫融解試劑盒中的各種溶液，溶解后除結構蛋白提取液外，其他試劑立即置于冰上；

1.1.2 結構蛋白提取液溶解后，可放置于37°C水浴中溫浴至透明后，常溫放置。

1.2蛋白提取工作液的準備

1.2.1胞漿蛋白提取工作液的準備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實驗時胞漿蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。

1.2.2胞核蛋白提取工作液的準備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實驗時胞核蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。

1.2.3膜蛋白提取工作液的準備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實驗時膜蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。

1.2.4 結構蛋白提取工作液的制備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實驗時結構蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。

2、對于培養(yǎng)細胞樣品：

2.1胞漿蛋白提取

2.1.1加2.0ml（2.0×107細胞 ）的胞漿蛋白提取工作液，在4°C條件下震蕩20分鐘；

2.1.2準備1-5ml的注射器，用注射器吹打步驟1震蕩過的溶液50-90次，在4°C條件下，15000g離心10分鐘。取上清液存于EP管中，即為胞漿蛋白；

2.2胞核蛋白的提取

取2.1.2步驟獲得的沉淀物加入4.0ml/20million cells冰浴的胞漿蛋白提取工作液，在4°C條件下震蕩5分鐘，4°C條件下15000g離心10分鐘，棄去上清液，沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰凍的胞核蛋白提取工作液, 在4°C條件下震蕩5分鐘，4°C條件下15000g離心10分鐘，上清液為細胞核蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存。

2.3胞膜蛋白的提取

在步驟2.2中的沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰凍的膜蛋白提取工作液, 在4°C條件下震蕩5分鐘，4°C條件下15000g離心10分鐘，上清液為細胞膜蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存。

2.4結構蛋白的提取

在步驟2.3的沉淀物中加入常溫或37°C水浴過的透明的結構蛋白提取工作液 0.5ml/20million cells，4°C條件下震蕩5分鐘，4°C條件下15000g離心10分鐘，保存上清液即為細胞骨架蛋白。

2.5待測蛋白的保存

待檢測濃度的蛋白存于-70°C。

3.對于組織樣品：

3.1胞漿蛋白提取

3.1.1加2.0ml/g的胞漿蛋白提取工作液,在4°C條件下研磨，重復勻漿兩次，至全部溶解；

3.1.2在4°C條件下，震蕩5分鐘，18000g離心10分鐘。取上清液存于EP管中，即為胞漿蛋白，沉淀物繼續(xù)實驗。

3.2胞核蛋白的提取

在步驟3.1.2中的沉淀物中加4.0ml/g的胞漿蛋白提取工作液,在4°C條件下震蕩5分鐘，4°C條件下18000g離心10分鐘，棄去上清液；沉淀物中加1.0ml/g冰凍的胞核蛋白提取工作液, 在4°C條件下震蕩5分鐘，4°C條件下18000g離心10分鐘，上清液為細胞核蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存；

3.3胞膜蛋白的提取

在步驟3.2中的沉淀物中加1.0ml/g冰凍的膜蛋白提取工作液, 在4°C條件下震蕩5分鐘，4°C條件下18000g離心10分鐘，上清液為細胞膜蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存。

3.4結構蛋白的提取

3.4.1在步驟3.3中的沉淀物中加入常溫或37°C水浴過的透明的結構蛋白提取工作液0.5ml/g，震蕩5分鐘，4°C條件下18000g離心10分鐘，保存上清液；

3.4.2在3.4.1步中的沉淀物中加1.5ml/g冰凍的胞漿蛋白提取工作液, 在4°C條件下震蕩5分鐘，4°C條件下18000g離心10分鐘,保存上清液；

3.4.3混合前兩步的上清液，此為骨架蛋白。

3.5待測蛋白的保存

待檢測濃度的蛋白存于-70°C。