一、試劑準(zhǔn)備：
MTT 溶液的配制：用 5mL MTT 溶劑溶解 25mg MTT，配制成 5mg/mL 的MTT 溶液。在無菌環(huán)境下，用 0.22µm 過濾后使用，或適當(dāng)分裝后-20°C 避光保存，保存期為半年，在2~8°C 避光保存 2 周。

二、操作流程：
1、實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞應(yīng)為對數(shù)生長期細(xì)胞。檢測時(shí)，應(yīng)設(shè)置 MTT 溶劑對照孔（不含細(xì)胞）。
2、用分光光度計(jì)在 690nm 處測量 96 孔板的背景吸光度值。
3、通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入 100µL 2000 個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100µL 5000 個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予 0~10µL 特定的藥物刺激。
4、每孔加入 10µL MTT 溶液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 4h。
5、孵育結(jié)束后，從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞，每孔加入 100µL 甲瓚溶解液。在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育，期間可用加樣槍吹打幫助溶解。直至甲瓚全部溶解。通常 37°C 孵育5~10min 左右。注：加入甲瓚溶解液后，1h 之內(nèi)讀板。
6、用分光光度計(jì)在 570nm 測定吸光度。所測的值減去 690nm 處測得的背景吸光度值，即為實(shí)際吸光度值。

1、由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
2、MTT 溶劑在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或 20-25°C 水浴溫育片刻至全部融解后使用。
3、MTT 配制成溶液后為黃色，需避光保存，長時(shí)間光照會導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請勿使用。MTT 溶液在 2~8°C、冰浴等較低溫度情況下會凝固，可以20-25°C 水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、甲瓚溶解液結(jié)凍或產(chǎn)生沉淀時(shí)可以 37°C 水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。
5、細(xì)菌、支原體或其他微生物可破壞 MTT 四唑環(huán)，污染的細(xì)胞不能使用該方法進(jìn)行檢測。
6、加入甲瓚溶解液時(shí)，高蛋白含量的樣本可能會形成沉淀。樣本的蛋白濃度相當(dāng)于10%胎牛血清（4mg 蛋白質(zhì)/mL 樣品）是可以接受。含高蛋白濃度的血清或血清產(chǎn)品需要稀釋后檢測。
7、含有酚紅的培養(yǎng)基和鹽溶液可提高的背景吸光度值，降低靈敏度。

MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit,MTT kit

2~8℃，避光保存，有效期12個(gè)月。