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細(xì)胞不貼壁的原因及解決方案參考
閱讀：1152 發(fā)布時(shí)間：2024-4-8細(xì)胞貼壁是細(xì)胞（除腫瘤細(xì)胞外）在體外培養(yǎng)條件下，完成貼壁后均為單層生長(zhǎng)，原因是貼壁細(xì)胞有接觸性抑制的特點(diǎn)。一般認(rèn)為接觸抑制是細(xì)胞間的一種識(shí)別作用，對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)形成與穩(wěn)定具有重要性的作用。由于貼壁細(xì)胞的一面是緊貼在培養(yǎng)瓶上的，如果其上方存在細(xì)胞與其相粘附，那么下方的細(xì)胞很快就會(huì)缺乏營(yíng)養(yǎng)餓死。
不貼壁的一些原因：
1. 胰酶消化時(shí)間把控不當(dāng)：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷，使細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。
2. 缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無(wú)血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細(xì)胞的貼壁效果會(huì)下降很多。
3. 支原體或細(xì)菌的污染。
4. 培養(yǎng)液配制、儲(chǔ)存不當(dāng)，如pH值過堿，Gln量太少等原因。
5. 復(fù)蘇的細(xì)胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。
6. 接種細(xì)胞數(shù)目太少，無(wú)法分泌足夠的細(xì)胞外基質(zhì)。
7. 復(fù)蘇時(shí)處理速度太慢，復(fù)蘇過程不當(dāng)。
如何促進(jìn)細(xì)胞貼壁：
1. 適度消化細(xì)胞：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長(zhǎng)，一般處理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落，2min足矣，P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊，可在PBS漂洗后，直接換新鮮培養(yǎng)基打散。
2. 最好用塑料瓶培養(yǎng)，如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養(yǎng)瓶，或者用鹽酸對(duì)培養(yǎng)瓶進(jìn)行蝕刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以幫助細(xì)胞貼附新的培養(yǎng)瓶，細(xì)胞不易貼壁，建議加多聚賴氨酸處理。
3. 正確配制消化液或培養(yǎng)液。
4. 使用合適的細(xì)胞外基質(zhì)或貼壁試劑。
5. 復(fù)蘇新的細(xì)胞，第一周用20%血清幫助細(xì)胞復(fù)原。
6. 傳代接種一定要鋪的均勻，避免細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)。
7. 細(xì)胞傳代24小時(shí)之內(nèi)，最好不要晃動(dòng)，以免影響貼壁。
8. 體內(nèi)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)在膠原構(gòu)成的基膜上，因此培養(yǎng)在有膠原的底物上有利于生長(zhǎng)。人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng)，可以用γ射線照射后的3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層，另外降低pH、Ca2+含量和溫度，均有利于上皮細(xì)胞生長(zhǎng)。