以下是關(guān)于大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒的實驗使用說明，綜合了多個來源的可靠信息：

　　BS-2970 大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法檢測樣本中IL-5含量。預(yù)包被抗大鼠IL-5抗體的微孔板捕獲樣本中的IL-5，再依次加入生物素化檢測抗體和HRP標記的鏈霉親和素，形成復(fù)合物后通過TMB顯色反應(yīng)定量。顏色深淺與IL-5濃度成正比，通過標準曲線計算含量?。

　　二、試劑盒組成

　　核心組分?：預(yù)包被酶標板、標準品(凍干粉，需復(fù)溶)、生物素化抗體、HRP酶結(jié)合物、TMB顯色液、終止液?

　　輔助溶液?：20×濃縮洗滌液(需1:20稀釋)、樣品稀釋液、標準品稀釋液?

　　耗材?：封板膜、密封袋?

　　三、樣本處理要求

　　血清/血漿?：采集后室溫靜置10-20分鐘，2000-3000g離心20分鐘，避免溶血或脂血干擾?。

　　細胞培養(yǎng)上清?：直接離心去除顆粒物，-20℃保存時避免反復(fù)凍融?。

　　組織勻漿?：PBS沖洗后稱重勻漿，離心取上清，建議添加蛋白酶抑制劑?。

　　四、標準操作步驟

　　標準品稀釋?：復(fù)溶后梯度稀釋(如2000-31.2 pg/mL)，建議設(shè)置8個濃度點?。

　　加樣與孵育?：

　　每孔加100μL樣本或標準品，37℃孵育90分鐘

　　洗滌5次后加入生物素化抗體(100μL/孔)，37℃孵育60分鐘?

　　顯色與檢測?：

　　加入TMB底物避光顯色15分鐘，終止反應(yīng)后30分鐘內(nèi)測定450nm吸光度?。

　　五、關(guān)鍵注意事項

　　質(zhì)量控制?：每板需設(shè)空白孔和標準曲線，OD值需扣除空白背景?。

　　干擾避免?：避免使用NaN3防腐劑(抑制HRP活性)，溶血/高脂樣本需預(yù)處理?。

　　保存條件?：未使用的板條需密封干燥保存于2-8℃，標準品復(fù)溶后需當(dāng)日使用?。

　　六、性能參數(shù)

　　檢測范圍?：典型為15.6-1000 pg/mL，靈敏度可達3.9 pg/mL?。

　　精密度?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)分別<10%

　　注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據(jù)，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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