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一、選擇性液體計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的介紹

  在GB4789.28中，列舉了三個(gè)選擇性液體計(jì)數(shù)培養(yǎng)基：月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（LST）、煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）和EC肉湯，此類培養(yǎng)基主要用于特定菌株的MPN法計(jì)數(shù)，培養(yǎng)基本身具有一定的選擇性，同時(shí)目標(biāo)菌在培養(yǎng)基中可觀察到產(chǎn)氣反應(yīng)，以此進(jìn)行判斷所檢目標(biāo)菌是否存在。

二、培養(yǎng)基的出廠檢驗(yàn)

  待測(cè)培養(yǎng)基制備：按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制，分裝至試管，每管10mL，并加入小倒管，滅菌冷卻后備用。使用前應(yīng)觀察倒管內(nèi)是否存在氣體，若倒管內(nèi)存在氣體，應(yīng)排氣后再使用。

1.目標(biāo)菌的檢驗(yàn)

  菌懸液制備：將質(zhì)控菌株接種至非選擇性肉湯或平板中進(jìn)行活化培養(yǎng)，使用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進(jìn)行十倍系列稀釋至含菌量為10-100CFU/mL。

  接種及培養(yǎng)：吸取1mL制備好的菌懸液加入至待測(cè)培養(yǎng)基試管中，接種2支平行，同時(shí)使用TSA（或其他適宜培養(yǎng)基）進(jìn)行傾注，計(jì)數(shù)接種量，置于標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。

  結(jié)果判定：接種目標(biāo)菌的試管濁度值應(yīng)達(dá)到2，倒管內(nèi)應(yīng)有氣體產(chǎn)生，氣體充滿倒管1/3以上。

2.非目標(biāo)菌的檢驗(yàn)

  菌懸液制備：將質(zhì)控菌株接種至非選擇性肉湯或平板中進(jìn)行活化培養(yǎng)，使用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進(jìn)行十倍系列稀釋至含菌量為1000-5000CFU/mL。

  接種及培養(yǎng)：吸取1mL制備好的菌懸液加入至待測(cè)培養(yǎng)基試管中，接種2支平行，同時(shí)使用TSA（或其他適宜培養(yǎng)基）進(jìn)行傾注（比接種梯度小1-2個(gè)稀釋度），計(jì)數(shù)接種量，置于標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。

  結(jié)果判定：接種非目標(biāo)菌的試管濁度值應(yīng)為0或1，無(wú)產(chǎn)氣現(xiàn)象。

三、培養(yǎng)基的驗(yàn)收方法

  將質(zhì)控菌株接種至非選擇性肉湯培養(yǎng)基中過(guò)夜培養(yǎng)，稀釋至10^-3，也可采用其他方法制備含菌量10⁵-10⁷CFU/mL的菌懸液，使用1μL接種環(huán)挑取1環(huán)菌液，接種至待測(cè)培養(yǎng)基中，置于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的條件進(jìn)行培養(yǎng)。

  結(jié)果判定：接種目標(biāo)菌的試管濁度值應(yīng)達(dá)到2，倒管內(nèi)氣體充滿1/3以上；接種非目標(biāo)菌的試管濁度應(yīng)為0或1，無(wú)產(chǎn)氣現(xiàn)象。

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