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PriCells:原代細胞鑒定技術

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一、形態(tài)學鑒定
1. 在倒置顯微鏡中直接觀察活細胞的形態(tài)學特征
2. 細胞染色檢查 :
a) 將無菌玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,加細胞懸液后培養(yǎng);
b) 待細胞長滿玻片后取出,用 PBS 清洗,之后放于載玻片上,待其自然干燥;
c) 用 PBS/甲醇(1:1)固定 15 分鐘;
d) 棄固定液,加合適的染色液染色;
e) 染色完畢后用清水洗凈,置于空氣中干燥,
f) 干燥后,用二甲苯透明,光學樹脂封片后觀察。


二、免疫組織細胞化學鑒定
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬
片;
2. PBS 清洗標本 3 次,各 1 分鐘;
3. 4%多聚甲醛固定 15 分鐘;
4. 置于空氣中干燥;
5. PBS 清洗標本 3 次,各 2 分鐘;
6. 0.5%Triton X-100 孵育 1 次 20 分鐘;
7. PBS 清洗標本 3 次 各 2 分鐘;
8. 3%H2O2孵育 15 分鐘;
9. DPBS 清洗標本 3 次 各 2 分鐘;
10. 封閉血清孵育(5%正常二抗血清 DPBS 液 20 分鐘)
11. 一抗孵育,4℃ 過夜或 37℃ 60 分鐘;
12. PBS 清洗標本 3 次 各 5 分鐘;
13. 二抗工作液孵育(濕盒)37℃ 30 分鐘;
14. PBS 清洗標本 3 次 各 5 分鐘;
15. C 液(濕盒) 37℃ 30 分鐘;
16. PBS 清洗標本 3 次,各 5 分鐘;
17. 用顯色液進行顯色;
18. 蒸餾水洗滌 2 次 1 分鐘;
19. 蘇木素復染 1 分鐘;
20. 清水洗滌 30 分鐘;
21. 光學樹脂封片后觀察。

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