使用對象

雙酚A親和柱能夠特異性的純化樣品中的雙酚A和雙酚S，它采用了柱狀瓊脂糖凝膠作為固相載體，瓊脂糖凝膠與雙酚A抗體偶聯形成免疫吸附劑，裝柱制成免疫親和柱。它能夠特異性的純化樣品中的雙酚A。雙酚A親和柱廣泛地應用于食品和飲料等樣品的提取，該方法速度快、操作簡單、準確性高，對提高食品的質量和安全性起到十分重要的作用。

該說明書方法應用親和柱方法檢測食品中雙酚A的檢測方法。

GB 5009.305-2025 食品安全國家標準　食品中雙酚A、雙酚F和雙酚S的測定

儲存條件

該親和柱保存在2-8 °C條件下，絕對不能冷凍，保質期為18個月。建議在室溫（18-30°C）下使用。

實驗溶液制備

l 甲醇-水溶液(80+20):量取甲醇80mL,加入水20mL,混勻。

l 甲醇-水溶液(40+60):量取甲醇40mL,加入水60mL,混勻。

l 鹽酸溶液(10+90):量取10mL濃鹽酸，加入90mL水中，混勻。

l PBS溶液：將PBS緩沖液試劑包（貨號：G3001）用1000mL純水溶解，混勻。

分析步驟

GB 5009.305-2025方法

1.0樣品提取

1.1 肉及肉制品、水產品、固態(tài)及半固態(tài)乳制品(乳粉、發(fā)酵乳等)、嬰幼兒配方食品

稱取1g試樣(精確至0.01g),置于50mL聚丙烯離心管中,加入50μL同位素內標混合使用液,振蕩混合后靜置30min。加入2mL水,渦旋振蕩30s,再加入5mL乙腈渦旋混合?；旌弦撼曁崛?5min,4 ℃下10000r/min離心10 min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40 ℃下用氮氣緩緩吹至約2mL,加入8mLPBS混勻,待凈化。

1.2 蛋、乳及液態(tài)乳制品

稱取1g試樣(精確至0.01g),置于50mL聚丙烯離心管中,加入50μL同位素內標混合使用液,振蕩混合后靜置30 min。加入5mL乙腈,渦旋混合后超聲提取 15 min,4 ℃ 下 10000r/min 離心10min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40 ℃下用氮氣緩緩吹至約2mL,加入8mLPBS混勻,待凈化。

1.3 谷物及嬰幼兒谷類輔助食品

稱取1g試樣(精確至0.01g),置于50mL聚丙烯離心管中,加入50μL同位素內標混合使用液,振蕩混合后靜置30min。加入10 mL 甲醇-水溶液(80+20),渦旋振蕩30s,超聲提取15 min,4 ℃下10000r/min離心10min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40 ℃下用氮氣緩緩吹至約2mL,加入8mLPBS混勻,待凈化。

1.4 蔬菜、水果

稱取1g試樣(精確至0.01g),置于50mL聚丙烯離心管中,加入100μL鹽酸溶液(10+90)混勻,再加入50μL 同位素內標混合使用液,振蕩混合后靜置30min。加入5mL乙腈,渦旋振蕩30s,超聲提取15min,4 ℃10000r/min離心10min。取上清液置于玻璃氮吹管中,40 ℃下用氮氣緩緩吹至約2mL,加入8mLPBS混勻,待凈化。

1.5 飲料

稱取1g試樣(精確至0.01g),置于2mL聚丙烯離心管中,加入50μL同位素內標混合使用液,振蕩混合后靜置30min。10000r/min離心10min。取上清液至50mL 聚丙烯離心管中,加入10mLPBS溶液混勻,待凈化。

 注:澄清試樣(如純凈水、礦泉水等)可不離心,直接加入 PBS混勻。

2.0試樣凈化

   2.1 親和柱活化

        將免疫親和柱連接于10.0mL注射器下。調節(jié)壓力使柱子保護溶液以約2mL/min（1滴/秒）流速緩慢通過免疫親和柱，直至少量空氣通過柱體。準確量取5mL 親和柱活化液（親和柱產品標配）淋洗親和柱，流速為1滴/秒，直至少量空氣通過柱體。用5.0mL純水淋洗柱子1次，棄去全部流出液，再用10.0mLpH7.4 PBS溶液淋洗柱子，流速為1滴/秒，待最后2-3mL溶液充滿柱子時，停止加壓，用塞子堵住底部出液口，待用。

注：為了進一步提高雙酚A免疫親和柱的凈化和吸附效果，該親和柱使用前需要活化處理?；罨蟮挠H和柱請在1小時內使用。 

2.2 親和柱凈化

取1.0步驟的待凈化液全部過柱, 流速為1滴/秒，棄去全部流出液, 再用10mL 水淋洗免疫親和柱，流速為1-2滴/秒，待水滴完后, 用真空泵抽干免疫親和柱。加入1 mL甲醇洗脫, 流速為1-2滴/秒，收集洗脫液于玻璃氮吹管中, 40 ℃下用氮氣緩緩吹干。 準 確 加 入0.40mL 甲醇, 渦旋混合10s,再準確加入0.60 mL 水,渦旋混合后轉移至 2 mL 聚丙烯離心管中, 10000r/min下離心5min,取上清液供液相色譜-串聯質譜儀測定。

注意事項

1) 不要隨便更改操作說明書中的操作步驟，如需更改請與本公司技術部聯系，確認更改是否合理。

2) 操作步驟中，樣品過柱，淋洗，洗脫時，一定要控制好流速，不能太快，否則會使檢測結果偏低。

3）  本實驗盡量減少使用塑料制品容器，尤其是PC材質塑料用品，實驗用水盡量使用放置玻璃器皿中蒸餾。

                                         親和柱配置清單

                   需要準備的設備及試劑