β-Amyloid ELISA 試劑盒

——定量檢測 Aβ40/Aβ42

　　阿爾茨海默癥（Alzheimer's Disease, AD），俗稱老年癡呆癥，其特征是在大腦神經(jīng)細(xì)胞中存在老年斑（Senile Plaques，SPs） 和神經(jīng)元纖維纏結(jié)（Neuro Fibrillary Tangles，NFT），老年斑的主要組成蛋白是 β- 淀粉樣多肽（Amyloid Peptide，Aβ）40 和 42（43），Aβ42 比 Aβ40 更容易發(fā)生聚集。因此，蛋白樣多肽的聚集開始于 Aβ42 而不是 Aβ40。出現(xiàn)了 Aβ42 而沒有出現(xiàn) Aβ40 是阿 爾茨海默癥的早期特征；出現(xiàn)了 Aβ40，尤其是在成熟老年斑的中心部分出現(xiàn)則代表進入阿爾茨海默癥的晚期階段。

　　本產(chǎn)品可檢測與阿爾茨海默病相關(guān)的淀粉樣蛋白β 蛋白質(zhì)（1-40）以及淀粉樣蛋白β 蛋白質(zhì)（1-42）的高靈敏度 ELISA 試劑盒。與以往試劑盒相比較，檢測靈敏度提高約 10 倍，檢測范圍在 0.1~20.0（pmol/L）。

　　另外，因為以往產(chǎn)品同樣標(biāo)志抗體Fab’化，非特異性結(jié)合降低。由于運用的是武田藥品工業(yè)株式會社開發(fā)的特異性非常高的單克隆抗體，不僅是組織提取液、培養(yǎng)上清液、腦脊髓液，而且以前檢測較困難的血漿中 Aβ40 以及 Aβ42 亦可高靈敏度檢測。

◆特點

●  可檢測多種樣品類型：腦組織樣品，培養(yǎng)基上清樣品，腦脊髓液樣品， 血漿樣品等

●  特異性強的抗體，避免非特異性結(jié)合

　 BAN50：Ａβ肽Ｎ末端１-16 特異性

　 BNT77：Aβ11-28特異性

 　BA27：Aβ40 Ｃ末端特異性

　 BC05：Aβ42 Ｃ末端特異性

●  高靈敏度，可檢測至 pmol 級含量

●  使用此產(chǎn)品的文章已在 Science、Biochemistry、Neuron 等多家國際頂尖刊物發(fā)表

 ◆檢測原理

◆試劑盒種類

試劑盒組成

◆實驗流程

① 加入100 μL 的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，在４度冰箱中密封過夜。  ↓ ② 加入 HRP 標(biāo)記的抗體溶液，在４度冰箱中孵育。 ↓ ③ 加入100 μL TMB 溶液室溫孵育 30 分鐘，避光，密封蓋子，進行顯色反應(yīng)。 ↓ ④ 加入100 μL 終止液，測 OD 450 nm值。

◆案例

案例1. 人、小鼠血漿的測定

　　使用 EDTA2K 真空采xue管采血，置于 5000 g、4℃、離心15分鐘，分離血漿，使用之前存放于-80℃。

　　用試劑盒附帶的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，４倍樣本稀釋后測定。

　?。?Aβ（1-40）以及Aβ（x-40）的測定使用人β淀粉樣蛋白（1-40）ELISA試劑盒 WakoⅡ（產(chǎn)品編號：298-64601）以及人/大鼠β淀粉樣蛋白（40）ELISA試劑盒 WakoⅡ（產(chǎn)品編號：294-64701）。

案例2. 小鼠腦組織的測定

　　用 2 mL 的 Tris 鹽水提取12月齡 APP 轉(zhuǎn)基因小鼠（J20）的腦半球，使用之前置于-20℃保存。

　　用試劑盒附帶的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，２倍樣本稀釋后測定。

　　除了轉(zhuǎn)基因（tg）小鼠，也可測定野生型（wt）小鼠的微量 Aβ 。

（數(shù)據(jù)提供：東京大學(xué)大學(xué)院藥學(xué)研究科 臨床藥學(xué)教室 巖坪教授 橋本助手）

標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　用試劑盒附帶的標(biāo)準(zhǔn)溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，在 0.1~20.0（pmol/L）范圍內(nèi)，接近于直線。

加標(biāo)回收測試

　　向血漿中分別加入５、10、20（pmol/L），４倍稀釋后記錄測定時的回收率（％）（測定值/理論值）?；撅@示較高的回收率。

稀釋實驗

　　將Ａ、Ｃ、Ｅ的正常人血漿稀釋２~16 倍后求稀釋曲線。結(jié)果顯示，特別是人/大鼠系列獲得了良好的稀釋曲線。

◆Aβ相關(guān)ELISA試劑盒選擇指南

※1  Aβ(x-40)、Aβ(x-42)為N末端被切斷或修飾的Aβ肽。

※2  與292-62301比較抗原抗體反應(yīng)相對穩(wěn)定

※3  與294-62501比較抗原抗體反應(yīng)相對穩(wěn)定

※4  未驗證

※5  換算為MAP16肽

◆適用樣品

※2  與292-62301比較抗原抗體反應(yīng)相對穩(wěn)定

※3  與294-62501比較抗原抗體反應(yīng)相對穩(wěn)定

※4  未驗證

※6  可檢測，但與血漿相比檢測數(shù)值容易隨時間降低