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推“柱”之薦｜配方顆粒色譜柱推薦之葛根
在前幾期，我們重點(diǎn)為大家介紹并推薦了適用于中草藥檢測的各類安捷倫色譜柱，以便大家在日后的檢測工作中匹配使用。本期將繼續(xù)帶來適用于葛根配方顆粒檢測的色譜柱推薦，跟上我們，精彩繼續(xù)！
Agilent 在 2003 年首家推出了亞 2 微米粒徑的色譜柱，由此掀開了超高效液相色譜分離（UHPLC）的序幕。ZORBAX 系列的 UHPLC 色譜柱中，分為快速高通量分離（RRHT）和超高壓快速高分離度（RRHD）兩個(gè)系列，高壓力耐受分別為 600bar 和 1200bar。ZORBAX RRHD Plus C18 和 SB C18 是中藥配方顆粒中常用 UHPLC 色譜柱。本實(shí)驗(yàn)選用的色譜柱 ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18，其固定相表面通過致密鍵合和雙封端處理，對(duì)中藥中生物堿、皂苷、黃酮、萜類等成分具有優(yōu)異的峰形和分離度。
根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局 《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》中葛根配方顆粒的檢測項(xiàng)目，對(duì)其特征譜圖和含量測定都采用 UHPLC 方法。特征譜圖和含量測定中要求理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于 4000，供試品呈現(xiàn)的特征峰保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品相對(duì)應(yīng)，相對(duì)保留時(shí)間在規(guī)定范圍內(nèi)（±10%）。本文采用 1290 Infinity II 超高效液相色譜儀以及 ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 ，2.1x100mm，1.8μm 色譜柱對(duì)葛根配方顆粒的特征譜圖進(jìn)行了分析，并對(duì)葛根配方顆粒中葛根素的含量進(jìn)行了測定。此外，我們也對(duì)該方法進(jìn)行了加速，能夠?qū)崿F(xiàn)更快速的分析。
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特征譜圖
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖 1. 葛根配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照譜圖、供試品重現(xiàn)譜圖、色譜柱替代后供試品特征譜圖及方法再加速的供試品特征圖譜比較 （峰 3(S):葛根素；峰 8:黃豆苷元）
色譜條件：
標(biāo)準(zhǔn)方法：
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色譜柱：BEH C18 (2.1x100mm, 1.7 μm)
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流動(dòng)相：A：乙腈；B：H2O（0.1%磷酸）
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梯度：0-10min,94%-91%B；10-14min,91%B-89%B；14-22min,89-70%B；22~27min,70%B; 后運(yùn)行，5min
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流速：0.4ml/min
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柱溫：30 °C
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檢測波長：250 nm(4nm), Ref: 400 ±50 nm; 采樣頻率：40Hz
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進(jìn)樣量：1 μL
替代方法：
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色譜柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18, 2.1x100mm, 1.8μm；
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柱溫：40℃
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其余同上。
加速方法：
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色譜柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18, 2.1x100mm, 1.8μm；
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梯度：0~6.7min，94%-91%B；6.7-9.5min，91%B-89%B；9.5-14.9min,89-70%B；14.9-18.3min，70%B; 后運(yùn)行，3 min
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流速：0.6ml/min
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柱溫：40℃
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其余同上。
系統(tǒng)適用性測試：
表 1. 替代色譜柱后方法的系統(tǒng)適用性測試結(jié)果
表 2. 加速方法的系統(tǒng)適用性測試結(jié)果
結(jié)果
1）采用 ZORBAX Eclipse Plus C18 柱，特征圖譜中各個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間*在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍內(nèi)，可以替代原標(biāo)準(zhǔn)中推薦色譜柱；
2）對(duì)比原標(biāo)準(zhǔn)方法和色譜圖，特征峰 8 明顯為疊加峰，采用替代色譜柱和方法能夠較好將特征峰 8 分離成 2 個(gè)峰，兩個(gè)特征峰 UV 光譜相似，但不*相同，顯然通過替代色譜方法能更有效控制葛根配方顆粒產(chǎn)品質(zhì)量；
3） 特征圖譜方法即含量測定方法，采用替代色譜柱方法和加速方法時(shí)，目標(biāo)峰的理論板數(shù)高于標(biāo)準(zhǔn) 10 倍以上，*滿足要求；
4） 加速方法分析時(shí)間縮短約 9 分鐘，且各特征峰的分離良好，相對(duì)保留時(shí)間仍在規(guī)定范圍內(nèi)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)選用 ZORBAX Eclipse Plus C18 色譜柱對(duì)葛根配方顆粒特征譜圖及含量進(jìn)行了檢測，均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。原方法流速較低（0.4 ml/min），分析時(shí)間較長。通過提升流速，分析時(shí)間減少約 9 分鐘，且相對(duì)保留時(shí)間、系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)結(jié)果*滿足要求。
儀器系統(tǒng)及色譜柱推薦
1290 Infinity II 四元 UHPLC 系統(tǒng)：全能泵(G7104A)，自動(dòng)進(jìn)樣器（G7129B），柱溫箱(G7116B)，DAD(G7117A)
其它詳細(xì)操作可以參考 Agilent 配方顆粒圖譜集，或聯(lián)系 Agilent。