磁珠提取實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光集團(tuán)，利用熒光信號來實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板濃度進(jìn)行定量分析。

 

　　病原學(xué)檢測是動物疾病確診的關(guān)鍵點(diǎn)，而聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是目前病原檢測的常用的分子生物學(xué)技術(shù)，具有高敏感性的特征。PCR技術(shù)發(fā)展已日趨完善，并在此基礎(chǔ)上建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR、套式、多重、降落PCR等技術(shù)，逐漸成為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測手段。

 

　　該技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床疾病診斷各種傳染病診斷和療效評價(jià)；臨床疾病診斷動物疾病檢測；食源微生物、食品過敏源、轉(zhuǎn)基因研究等食品安全操作等等各個(gè)領(lǐng)域。

 

　　擴(kuò)增曲線是PCR過程中，以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)所繪制的曲線。主要用于反映qPCR的動態(tài)進(jìn)程；溶解曲線是用來驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物特異性的，如果產(chǎn)物是單一條帶，溶解曲線就會出現(xiàn)單峰，如果有引物二聚體或其它非特異性擴(kuò)增，就會出現(xiàn)至少兩個(gè)峰。

 

　　磁珠提取實(shí)時(shí)熒光定量PCR在基因分型中的應(yīng)用：

 

　　例如SNP檢測，甲基化檢測等。

 

　　SNP檢測是確定一對染色體的每種基因的兩個(gè)拷貝，哪種點(diǎn)突變在這兩個(gè)拷貝中存在，因此利用熒光定量PCR方法，并配合芯片技術(shù)可以快速靈敏的檢測到SNP結(jié)果。

 

　　DNA甲基化是Z早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一，真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5’－端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’－甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá)，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。