來自羅氏的 Gregor Jordan 等人基于 Gyrolab 平臺(tái)開發(fā)了一種全血清中檢測(cè)游離抗原的免疫分析方法，該方法旨在解決以下游離物分析中的挑戰(zhàn)：
樣本的稀釋導(dǎo)致抗原-抗體復(fù)合物解離，高估游離抗原濃度
抗體-抗原復(fù)合物半衰期短（<100秒），傳統(tǒng)LBA方法無法準(zhǔn)確捕捉
存在治療性抗體時(shí)，難以區(qū)分游離與結(jié)合狀態(tài)的抗原
該方法采用橋接免疫分析原理，具體步驟如下：
1
將標(biāo)記后的捕獲抗體包被在鏈霉親和素的親和柱上
2
加入未稀釋血清樣本，使游離抗原與捕獲抗體結(jié)合
3
加入標(biāo)記的檢測(cè)抗體與抗原的另一表位結(jié)合
4
檢測(cè)信號(hào)，定量游離抗原
方法關(guān)鍵要求
捕獲抗體與檢測(cè)抗體識(shí)別的抗原表位不重疊
捕獲抗體與治療性抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原的相同表位
孵育時(shí)間極短（優(yōu)選<2秒）
無需樣本稀釋，避免復(fù)合物解離
研究目的
評(píng)估抗體藥物對(duì) CCL2 的“清除效率"，即抗體是否有效結(jié)合并清除游離 CCL2。
研究方法
平臺(tái)與方法
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
校準(zhǔn)曲線與質(zhì)控
校準(zhǔn)范圍：2430 pg/mL → 10 pg/mL
QC 樣本：
High QC：1820 pg/mL
Mid QC：230 pg/mL
Low QC：30 pg/mL
接受標(biāo)準(zhǔn)：
±20% 偏差，CV < 15%
藥物干預(yù)組
CNTO0888：?jiǎn)翁禺愋钥?CCL2 抗體（對(duì)照）
CKLO2-SG1095：雙特異性抗 CCL2 抗體（實(shí)驗(yàn)組）
濃度設(shè)置：
低劑量：7.5 ng/mL 或 15 ng/mL
高劑量：10 μg/mL
結(jié)果與討論
CNTO0888 在高濃度下幾乎全清除游離 CCL2
CKLO2-SG1095 的清除效率略低，但仍顯著優(yōu)于空白組
低劑量下雙抗仍有中等清除能力，提示其劑量依賴性
研究目的
在不稀釋的血清樣本中，快速、精準(zhǔn)地測(cè)定游離補(bǔ)體 C5 的濃度，用于評(píng)估抗 C5 抗體藥物（如 eculizumab、crovalimab）的體內(nèi)藥效。
研究方法
平臺(tái)與方法
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍： 0.55 – 3000ng/ml
LOQ：0.5 ng/mL，足以檢測(cè) < 0.1 % 的游離 C5（人總 C5 ≈ 400 nM）
總 結(jié)
方法技術(shù)優(yōu)勢(shì)
Gyrolab 平臺(tái)有的免孵育流穿模式，大程度降低基質(zhì)中的非特異性結(jié)合，有效降低基質(zhì)干擾，在游離物分析中可以支持全血清檢測(cè)，并且減少因孵育造成的抗體-抗原復(fù)合物的解離，使游離物的分析更加準(zhǔn)確高效。
參考文獻(xiàn)：
[1] Method for determining the free antigen of an antibody in a sample, Gregor Jordan, Martin Schaefer, Maria Viert; Pub No. US2023/0393125 A1。
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