（1）滴水破開(kāi)法

首先將凍干粉甩至底部圓球位置，然后用70%的酒精脫脂棉球擦凈凍干管，將凍干管的尖-端（注意不是圓球端）放在火焰上加熱。然后迅速滴幾滴無(wú)菌水至加熱處，此時(shí)凍干管的尖-端會(huì)自動(dòng)破開(kāi)。最后用鑷子輕輕敲下凍干管尖-端，并將凍干管開(kāi)口處在火焰上加熱滅菌一下，并且保持下面的菌種菌種活化步驟在火焰旁操作。然后逐漸敲開(kāi)凍干管，直至適當(dāng)位置。（敲開(kāi)位置以可以很好注入無(wú)菌水以及吸取混勻后的液體為準(zhǔn)）

(1)酒精燈上加熱

(2)滴加冷的無(wú)菌水，菌種管自動(dòng)裂開(kāi)

(3)鑷子掰開(kāi)

(4) 加入無(wú)菌水混勻菌粉，然后全部

（2）直接敲開(kāi)法

首先將凍干粉甩至底部圓球位置，然后用70%的酒精脫脂棉球擦凈凍干管，將凍干管的尖-端（注意不是圓球端）放在火焰稍微加熱滅菌。然后直接用大鑷子敲打尖-端，敲開(kāi)后將破口處在火焰上加熱滅菌一下，并且保持下面的菌種菌種活化步驟在火焰旁操作。 然后逐漸敲開(kāi)凍干管，直至適當(dāng)位置。（敲開(kāi)位置以可以很好注入無(wú)菌水以及吸取混勻后的液體為準(zhǔn)）。

1)直接用鑷子敲開(kāi)

(2)加入無(wú)菌水混勻菌粉，然后全部接種至培養(yǎng)基上

菌種復(fù)蘇中注意事項(xiàng)：

（1）菌種活化前，如要長(zhǎng)期保藏，可將凍干管放在4-10度條件下保存。

（2）此凍干菌是經(jīng)凍干燥并抽真空保存的，開(kāi)啟后必須一次使用完，不能剩菌粉下次使用。

（3）凍干管中大部分是用牛奶做保護(hù)劑，菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時(shí)要全部菌懸液接種在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復(fù)蘇不成功。

（4）凍干粉是在凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，有時(shí)延滯期較長(zhǎng)，如在說(shuō)明書(shū)建議的培養(yǎng)時(shí)間還未長(zhǎng)出，請(qǐng)繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng)24小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，直至菌種培養(yǎng)出。

（5）正常情況下，菌種是需要培養(yǎng)2代后才會(huì)具備穩(wěn)定的活性，所以建議做2次繼代培養(yǎng)后才能用于您后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

（6）打開(kāi)凍干管應(yīng)在專(zhuān)業(yè)的微生物專(zhuān)業(yè)人員才可操作，注意生物危害程度為三級(jí)的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作。其中標(biāo)準(zhǔn)菌種可以在超凈臺(tái)中操作，并且做好個(gè)人防護(hù)。開(kāi)管時(shí)要注意做好個(gè)人面部防護(hù)，防止碎片飛入眼中。

（7）以上開(kāi)管操作都應(yīng)該在安全柜或超凈臺(tái)中操作，并且操作完后所有器皿都要經(jīng)滅菌后再銷(xiāo)毀。