HIS標(biāo)簽蛋白,重組人DLK1/FA1蛋白（His標(biāo)簽）
UA011178

產(chǎn)品描述

重組人DLK1/FA1蛋白（Delta Like Non-Canonical Notch Ligand 1/Fetal Antigen 1）是一種重要的跨膜蛋白，參與脂肪形成、神經(jīng)內(nèi)分泌分化和干細(xì)胞自我更新等生物學(xué)過程。本產(chǎn)品為His標(biāo)簽重組蛋白，通過哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)制備，具有高純度和生物活性。

產(chǎn)品特性

• 表達(dá)系統(tǒng)：哺乳動物細(xì)胞表達(dá)（保留天然蛋白修飾）

• 蛋白標(biāo)簽：C端6×His標(biāo)簽

• 蛋白形式：可溶性蛋白

• 純度：>90%（SDS-PAGE檢測）

• 分子量：約30-35 kDa（糖基化形式）

• 內(nèi)毒素水平：<1.0 EU/μg

• 保存條件：-80℃保存（避免反復(fù)凍融）

• 緩沖液組成：PBS，pH 7.4

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生物學(xué)功能

• 調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞分化

• 影響神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞發(fā)育

• 調(diào)控干細(xì)胞自我更新

• 參與組織再生過程

應(yīng)用領(lǐng)域

• 脂肪形成機(jī)制研究

• 干細(xì)胞生物學(xué)研究

• 神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤研究

• 抗體開發(fā)與篩選

• 細(xì)胞功能研究

質(zhì)量控制

• 每批次提供SDS-PAGE純度檢測報告

• 提供Western Blot驗(yàn)證數(shù)據(jù)

• 嚴(yán)格的活性檢測標(biāo)準(zhǔn)

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使用建議

1. 使用前短暫離心

2. 推薦工作濃度：0.1-10 μg/mL

3. 避免反復(fù)凍融，建議分裝保存

4. 解凍后置于冰上使用

關(guān)于斯達(dá)特(Starter)，國產(chǎn)抗體專家：
杭州斯達(dá)特在為全球生命科學(xué)行業(yè)提供優(yōu)質(zhì)的抗體、蛋白、試劑盒等產(chǎn)品及研發(fā)服務(wù)。依托多個開發(fā)平臺：重組免單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗，重組蛋白開發(fā)平臺 (E.coli,CHO,HEK293,InsectCells)，已正式通過歐盟98/79/EC認(rèn)證ISO9001認(rèn)證ISO13485.

HIS標(biāo)簽蛋白是重組蛋白表達(dá)中常用的親和標(biāo)簽，利用其與金屬離子（如Ni²?、Co²?）的螯合作用實(shí)現(xiàn)蛋白純化。以下是典型實(shí)驗(yàn)操作流程，涵蓋表達(dá)、純化及檢測等關(guān)鍵步驟：  

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備  

材料與試劑  

表達(dá)載體：含目的基因與His標(biāo)簽融合序列的重組質(zhì)粒。  

宿主菌：常用大腸桿菌，根據(jù)載體選擇適配菌株。  

試劑：LB培養(yǎng)基、抗生素（如氨芐青霉素、卡那霉素）、IPTG（誘導(dǎo)劑）、結(jié)合緩沖液（含咪唑0-20mM，維持蛋白與樹脂結(jié)合）、洗脫緩沖液（含高濃度咪唑，如200-500mM，競爭性洗脫）、Ni²?親和樹脂、PBS緩沖液、蛋白酶抑制劑（如PMSF）等。  

儀器：搖床、離心機(jī)、層析柱、超凈臺、蛋白電泳設(shè)備等。  

預(yù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)  

確定IPTG誘導(dǎo)濃度（0.1-1mM）、誘導(dǎo)溫度（16-37℃）、誘導(dǎo)時間（2-24h），優(yōu)化表達(dá)效率（可選預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索條件）。  

二、His標(biāo)簽蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)  

轉(zhuǎn)化與篩選  

將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至宿主菌感受態(tài)細(xì)胞，涂布于含對應(yīng)抗生素的LB平板，37℃培養(yǎng)過夜，挑取單菌落。  

擴(kuò)大培養(yǎng)  

挑取單菌落接種至5-10mLLB液體培養(yǎng)基（含抗生素），37℃、200rpm搖床培養(yǎng)至OD???=0.6-0.8（對數(shù)生長期）。  

誘導(dǎo)表達(dá)  

按比例（如1:100）轉(zhuǎn)接至新鮮LB培養(yǎng)基，培養(yǎng)至OD???=0.6-0.8后，加入IPTG至終濃度（如0.5mM），設(shè)定誘導(dǎo)溫度（如37℃誘導(dǎo)4h，或16℃誘導(dǎo)16h，減少包涵體形成）。  

同時設(shè)對照組：未誘導(dǎo)的空載體菌和未轉(zhuǎn)化的宿主菌，用于后續(xù)蛋白特異性驗(yàn)證。  

三、菌體重懸與破碎  

收集菌體  

誘導(dǎo)結(jié)束后，4℃、8000×g離心10分鐘，棄上清，收集菌體沉淀。  

用預(yù)冷的結(jié)合緩沖液（含蛋白酶抑制劑）重懸菌體（按1g菌體：5-10mL緩沖液比例），冰浴放置。  

破碎菌體  

選擇合適的破碎方法釋放蛋白：  

超聲破碎：冰浴條件下，功率200-400W，工作3-5秒，間隔5-10秒，總時間10-20分鐘（避免產(chǎn)熱導(dǎo)致蛋白變性）。  

高壓均質(zhì)破碎：適用于大規(guī)模樣品，壓力800-1000bar，重復(fù)2-3次。  

破碎后，4℃、12000×g離心20分鐘，分離上清（可溶性蛋白）和沉淀（包涵體，若需純化需復(fù)性處理）。  

四、親和純化  

樹脂預(yù)處理  

取適量Ni-NTA樹脂，用結(jié)合緩沖液平衡3-5次（去除保存液，活化樹脂），裝入層析柱，使樹脂自然沉降。  

上樣結(jié)合  

將離心后的上清緩慢加入層析柱，控制流速（如1mL/min），使His標(biāo)簽蛋白與Ni²?充分結(jié)合（可重復(fù)上樣1-2次，提高結(jié)合率）。  

收集流穿液（未結(jié)合的雜蛋白），用于后續(xù)檢測。  

洗滌雜蛋白  

用5-10倍柱體積的結(jié)合緩沖液（含20-50mM咪唑）洗滌樹脂，去除非特異性結(jié)合的雜蛋白，收集洗滌液。  

可通過降低咪唑濃度或增加洗滌次數(shù)優(yōu)化純度（根據(jù)雜蛋白結(jié)合強(qiáng)度調(diào)整）。  

洗脫目的蛋白  

用含200-500mM咪唑的洗脫緩沖液洗脫，分批次收集洗脫液（每管1-2mL），標(biāo)記序號。  

若需更高純度，可梯度提高咪唑濃度（如200mM→300mM→500mM），分步洗脫。  

五、蛋白純度與濃度檢測  

SDS-PAGE電泳驗(yàn)證  

取誘導(dǎo)前、誘導(dǎo)后菌液、上清、流穿液、洗滌液、洗脫液各5-10μL，與上樣緩沖液混合，煮沸5分鐘，進(jìn)行SDS-PAGE電泳。  

考馬斯亮藍(lán)染色后，觀察洗脫液中是否出現(xiàn)單一目的條帶（根據(jù)預(yù)測分子量判斷），評估純度。  

蛋白濃度測定  

用BCA法或Bradford法測定洗脫液中蛋白濃度，選擇純度高、濃度高的洗脫組分合并。  

脫鹽處理（可選）  

若后續(xù)實(shí)驗(yàn)需去除咪唑，可通過透析或脫鹽柱將蛋白置換至PBS或其他緩沖液中，4℃短期保存或-80℃分裝凍存（避免反復(fù)凍融）。