引言

硫酸新霉素是從新霉素鏈霉菌( streptomyces fradiae) 的代謝產(chǎn)物中分離得到的多組分氨基糖類抗生素，抗菌譜廣作用強(qiáng)，因其耳、腎毒性強(qiáng)，臨床用于外用和口服。硫酸新霉素原料藥在國(guó)內(nèi)外藥典均有收錄［1-5］。

2025版中國(guó)藥典將于2025年10月1日起實(shí)施。硫酸新霉素在此次藥典修訂中，新增了有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)，對(duì)新霉胺、新霉素A及其他雜質(zhì)的限度做了規(guī)定。該方法為高效液相色譜法，使用C18色譜柱對(duì)以上組分進(jìn)行分離，流動(dòng)相為三氟乙酸/五氟丙酸/氫氧化鈉溶液，檢測(cè)器為脈沖安培檢測(cè)器［6］。該色譜條件在液相色譜儀上運(yùn)行時(shí)，往往存在以下問題：

1.系統(tǒng)不穩(wěn)定，靈敏度逐漸下降、重現(xiàn)性差；

2.柱效下降快，色譜柱壽命短；

3.流動(dòng)相含有高鹽和離子對(duì)試劑，與質(zhì)譜聯(lián)用存在挑戰(zhàn)。

賽默飛作為科學(xué)分析服務(wù)領(lǐng)域服務(wù)商，針對(duì)以上問題，提供本方法全流程的離子色譜解決方案。該方案包含全PEEK的離子色譜流路、流動(dòng)相、色譜柱、檢測(cè)器、質(zhì)譜以及專業(yè)的數(shù)據(jù)處理軟件。從流動(dòng)相的配制、方法的重現(xiàn)、雜質(zhì)的定量和定性，提供一站式的服務(wù)，幫助客戶輕松應(yīng)對(duì)藥典新項(xiàng)目帶來的挑戰(zhàn)。

圖1. 新霉素及其雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)

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01

儀器和色譜條件

儀器： Dionex™ ICS-6000離子色譜系統(tǒng)，含有雙泵、柱溫箱和AS-AP自動(dòng)進(jìn)樣器

色譜柱: Thermo Dionex™ IonPac™ AmG C18 ( 4×150mm，3 μm，PN 302693)

流動(dòng)相: 2%三氟乙酸溶液（含0.01%五氟丙酸，0.6%的50%氫氧化鈉）

流 速:  0. 8 mL /min

柱溫:   25 ℃;

柱后堿液: 50% NaOH溶液稀釋25倍

柱后溶液流速：0. 3 mL /min

進(jìn)樣量: 25 μL

檢測(cè)器：脈沖安培檢測(cè)器，四波形檢測(cè)電位

工作電極：3mm金電極（PN 063723）

參比電極：Ag /AgCl參比電極（PN 061879）

02

色譜圖

圖2. AmG C18色譜柱分離硫酸新霉素有關(guān)物質(zhì)的圖譜[7]（點(diǎn)擊查看大圖）

AmG C18色譜柱是賽默飛針對(duì)氨基糖苷類抗生素開發(fā)的色譜柱，對(duì)新霉素 B、新霉素 C 及各雜質(zhì)均能得到較好的分離，主峰峰形對(duì)稱，可分離出13個(gè)硫酸新霉素中的組分。

03

新霉素B、新霉素C和新霉胺的線性范圍見下表[7]

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04

重復(fù)性［7］

取同一批號(hào)硫酸新霉素樣品6份按照上述方法進(jìn)行測(cè)定，雜質(zhì)總量RSD( n =6) 為1. 10%，方法重復(fù)性良好。

05

與MS聯(lián)用對(duì)未知雜質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定

離子對(duì)試劑如三氟乙酸、五氟丙酸、七氟丁酸是氨基糖苷類抗生素分析常用的流動(dòng)相。借助于離子對(duì)試劑，結(jié)構(gòu)相近的氨基糖苷類抗生素物質(zhì)可以在C18色譜柱上得到滿意的分離。如需對(duì)氨基糖苷類抗生素進(jìn)行質(zhì)譜分析，則需對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫鹽處理。陽離子抑制器，可有效脫除流動(dòng)相中的陰離子。

圖3. 用于氨基糖苷類抗生素雜質(zhì)定性的IC-MS/MS聯(lián)用

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06

總結(jié)

賽默飛推出的氨基糖苷類抗生素分析系統(tǒng)，不僅能滿足中國(guó)藥典中硫酸新霉素和硫酸依替米星的檢測(cè)需要，也適用于USP、EP等其他藥典中使用HPLC-PAD方法檢測(cè)的抗生素，如硫酸慶大霉素、硫酸阿米卡星、鹽酸大觀霉素等。該方案具有以下優(yōu)勢(shì)：

AmG C18色譜柱分離度好，可耐受低pH的離子對(duì)流動(dòng)相，壽命更長(zhǎng)；

ICS 6000離子色譜系統(tǒng)，全流路PEEK材質(zhì)，保證了系統(tǒng)的穩(wěn)定性；

ICS6000 自帶的安培檢測(cè)器和金電極，對(duì)于氨糖抗生素具有超高的靈敏度；

輕松脫鹽，滿足質(zhì)譜聯(lián)用需求。

互動(dòng)話題：

你對(duì)硫酸新霉素和氨基糖類抗生素的測(cè)定還有哪些疑問？或者你對(duì)HPLC-PAD技術(shù)有什么看法？歡迎在評(píng)論區(qū)留言討論！

參考文獻(xiàn)：

1.《中國(guó)藥典》2020年版二部

2.  European Pharmacopeia 9.0: volume III ( 歐洲藥典 9.0: 卷 3) ［S］

3. The International Pharmacopoeia( 國(guó)際藥典第五版) ［S］

4. The United States Pharmacopeial40-The National Formulary 35: volume      III( 美國(guó)藥典 40-國(guó)家處方集 35: 卷 3) ［S］

5. Japanese Pharmacopeia XVII( 藥局方 17 版) ［S］

6. 《中國(guó)藥典》2025年版二部

7. 張倩,黃敏文,FANG Wang,等.HPLC-PAD法測(cè)定硫酸新霉素含量及其有關(guān)物質(zhì)[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2019,50(02):193-199.

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