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通過嚴(yán)格遵循上述操作規(guī)范，可顯著提升菌體密度(典型可達(dá)OD600=8-12)、產(chǎn)物收率及設(shè)備使用壽命。實(shí)際操作中需結(jié)合具體菌株生理特性建立標(biāo)準(zhǔn)化流程，并做好運(yùn)行日志記錄以便追溯優(yōu)化。
以下是液體菌種搖床的使用細(xì)節(jié)及關(guān)鍵要點(diǎn)說明：
一、前期準(zhǔn)備與容器處理
1. 容器選擇與滅菌
優(yōu)先選用三角瓶(常用250-500mL)或擋板式發(fā)酵罐，依據(jù)培養(yǎng)體積按不超過容器容積70%的比例裝液。玻璃器皿需經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，塑料瓶可采用環(huán)氧乙烷熏蒸滅菌，避免殘留抑制劑影響菌體生長。
2. 培養(yǎng)基配制
按菌株特性配置適宜的培養(yǎng)基(如LB培養(yǎng)基用于大腸桿菌)，調(diào)節(jié)初始pH值(一般細(xì)菌pH6.8-7.2，真菌偏酸性)。若需富集特定代謝產(chǎn)物，可添加誘導(dǎo)物或前體物質(zhì)。
二、接種與裝載規(guī)范
1. 無菌操作
在生物安全柜內(nèi)完成接種，火焰灼燒瓶口后拔除棉塞，接入適量菌種(接種量約5%-10%)，迅速封口并通過傳遞窗轉(zhuǎn)入搖床。注意操作時長控制在酒精燈火焰有效范圍內(nèi)。
2. 對稱平衡裝載
將含菌液的容器對稱放置于搖床上，確保負(fù)載均衡。偏心裝載會導(dǎo)致電機(jī)異常振動，縮短機(jī)械壽命。大容量培養(yǎng)時建議使用配重塊填補(bǔ)空位。
三、參數(shù)設(shè)置與監(jiān)控
1. 溫度控制
根據(jù)菌株最適生長溫度設(shè)定(如霉菌30℃、嗜熱菌55℃)，啟動預(yù)熱功能使腔體內(nèi)溫差≤±0.5℃。長時間運(yùn)行時每4小時校驗一次實(shí)際溫度，避免溫控失效導(dǎo)致菌體死亡。
2. 轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)
兼顧溶氧效率與剪切力損傷：普通好氧菌設(shè)200-300rpm，絲狀真菌可調(diào)至150rpm以下；厭氧培養(yǎng)需降低至80-120rpm并充氮置換氣體。觀察泡沫產(chǎn)生情況，必要時添加消泡劑。
3. 時間程序管理
采用分段控時策略：延遲期(0-6h)低速適應(yīng)，對數(shù)期提升至目標(biāo)轉(zhuǎn)速，穩(wěn)定期降速延長產(chǎn)酶/孢子形成階段。設(shè)置提前15分鐘減速程序，防止驟停引發(fā)渦流沖擊。
四、運(yùn)行過程管理
1. 狀態(tài)巡查
每小時檢查以下項目：① 固定裝置是否松動；② 冷凝水排放口暢通性；③ 瓶內(nèi)液面高度變化(判斷蒸發(fā)速率)；④ 異常聲響或異味出現(xiàn)。
2. 補(bǔ)料時機(jī)把控
采用間歇式流加策略，當(dāng)DO電極顯示溶解氧驟降時，通過無菌硅膠管補(bǔ)充碳源/氮源。補(bǔ)料體積單次不超過工作體積的10%，避免滲透壓突變。
3. 污染防控
發(fā)現(xiàn)渾濁度異常升高立即終止培養(yǎng)，取樣品鏡檢確認(rèn)污染情況。嚴(yán)重污染時應(yīng)先用消毒液擦拭搖床內(nèi)壁，再用紫外線照射30分鐘后方可繼續(xù)使用。
五、收獲與善后處理
1. 取樣技巧
采用虹吸法或注射器側(cè)向取樣，避免擾動底部沉淀物。取樣前后稱重記錄濕重變化，換算生物量積累曲線。
2. 廢棄物處理
帶壓容器需先降壓再開啟，含有致病因子的培養(yǎng)物應(yīng)經(jīng)121℃滅活30分鐘后排放。金屬夾具用75%乙醇浸泡消毒，塑料部件更換專用垃圾袋密封丟棄。
3. 設(shè)備保養(yǎng)
每月清理風(fēng)機(jī)濾網(wǎng)積塵，季度檢修傳動皮帶松緊度。長期不用時排空水箱并涂抹硅脂防銹，數(shù)碼顯示屏加蓋防護(hù)罩防塵。
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