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特色項(xiàng)目 | 含水解蛋白的特醫(yī)乳粉，你還在憂愁怎么分析乳鐵蛋白嗎？

來源：島津（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司 SGLC 2025年11月20日 09:47

乳鐵蛋白是乳及乳制品中重要營養(yǎng)指標(biāo)之一，常被用作營養(yǎng)強(qiáng)化劑添加在嬰幼兒配方食品中。但部分嬰幼兒會(huì)對乳蛋白過敏，需要食用含水解蛋白的嬰配乳粉或特醫(yī)乳粉。此類產(chǎn)品中的水解蛋白和多肽會(huì)干擾乳鐵蛋白檢測，導(dǎo)致國標(biāo)方法回收率不達(dá)標(biāo)。

行業(yè)反饋后，國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評估中心已明確現(xiàn)行的GB 5009.299-2024不適用于含有水解蛋白的嬰幼兒配方食品（其中包括特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品）^[1]。

特色項(xiàng)目 | 含水解蛋白的特醫(yī)乳粉，你還在憂愁怎么分析乳鐵蛋白嗎？

針對此問題，島津SGLC在國標(biāo)基礎(chǔ)上開發(fā)了專用緩沖鹽提取包，適用于乳蛋白部分水解、深度水解及氨基酸配方等特醫(yī)嬰兒配方乳粉，配合SHIMSEN肝素親和柱，可保證良好的回收率與重現(xiàn)性。相關(guān)方案如下：

話

題

一

#樣品前處理

采用專用提取鹽包(適用于水解嬰配粉，P/N：380-00930-10) + SHIMSEN 肝素親和柱(3mg/3mL, PN: 380-00930-02)進(jìn)行樣品處理，實(shí)驗(yàn)操作和緩沖鹽配置請按照完整版應(yīng)用案例進(jìn)行，步驟如下：

SHIMSEN 肝素親和柱

提取鹽

劃重點(diǎn)TIPs：

①專用提取液配制方法：提取緩沖鹽瓶內(nèi)加入375ml水，溶解，加入8g體積分?jǐn)?shù)為10%吐溫-20溶液，混勻，用磷酸調(diào)pH至6±0.2，用水定容至500ml；

②專用提取液的溫度不能超過50℃，否則乳鐵蛋白有失活的風(fēng)險(xiǎn)，致使回收率偏低，本實(shí)驗(yàn)采用48℃水??；

③離心完成后，立即移取10mL上清液到15mL離心管中備用，否則上層乳脂會(huì)逐漸再溶解到水溶液中，干擾后續(xù)的上柱以及上機(jī)分析；

④SHIMSEN 肝素親和柱包裝盒內(nèi)自帶磷酸鹽緩沖鹽包Ⅰ和Ⅱ，使用前按要求溶解定容后即可用于活化；

⑤小柱及待凈化液在上樣前要恢復(fù)到室溫；過柱時(shí)建議控制流速，每秒1-2滴(批量過柱時(shí)可采用自重流出)，流速過快會(huì)導(dǎo)致回收率偏低；

⑥優(yōu)先建議離心后直接上機(jī)分析，不通過針頭濾器，避免吸附損失；

⑦乳鐵蛋白容易被玻璃小瓶吸附，建議使用PP材質(zhì)的低吸附小瓶(PN：380-00511)。

話

題

二

#上機(jī)分析

2.1

分析條件

儀器：Shimadzu LC-20AD 高效液相色譜儀

色譜柱：Shim-pack Scepter C4-300（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31183-06；C4鍵合，30nm孔徑，有機(jī)雜化硅膠顆粒填料，耐受三氟乙酸等低pH體系）

柱溫：25 ℃

檢測波長：280 nm

流速：1.0 mL/min

進(jìn)樣量：50 μL

流動(dòng)相：A：0.1%三氟乙酸水溶液 B：乙腈

時(shí)間	0	14	14.1	24	24.1	40
A（%）	70	49	0	0	70	70
B（%）	30	51	100	100	30	30

2.2

結(jié)果與討論

2.2.1 色譜圖

乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖（12 μg/mL）

乳蛋白部分水解配方試樣空白樣品色譜圖

乳蛋白部分水解配方試樣加標(biāo)樣品（添加濃度：6 mg/100 g）色譜圖

乳蛋白深度水解配方試樣空白樣品色譜圖

乳蛋白深度水解配方試樣加標(biāo)樣品（添加濃度：6 mg/100 g）色譜圖

氨基酸配方試樣空白樣品色譜圖

氨基酸配方試樣加標(biāo)樣品（添加濃度：6 mg/100 g）色譜圖

2.2.2 三種水解配方特醫(yī)嬰配粉中乳鐵蛋白的添加回收結(jié)果

方案相關(guān)產(chǎn)品如下：

促

銷

活

動(dòng)

小知識(shí)

#乳鐵蛋白#

乳鐵蛋白（lactoferrin， LF）是一種分子量約為 80 kDa的鐵結(jié)合糖蛋白，具有鐵調(diào)節(jié)^[2]、免疫調(diào)節(jié)^[3]、促進(jìn)骨生長^[4]、保護(hù)消化系統(tǒng)健康^[5]等生理活性，是乳及乳制品中重要營養(yǎng)指標(biāo)之一，常被用作營養(yǎng)強(qiáng)化劑添加在嬰幼兒配方食品中。

GB14880-2012《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑使用標(biāo)準(zhǔn)》^[6]中明確規(guī)定，嬰幼兒配方食品中乳鐵蛋白的最大允許使用量為1.0g/kg。在實(shí)際樣品的乳鐵蛋白測試過程中，可能會(huì)存在峰型拖尾、柱上殘留、曲線線性不佳、回收率不穩(wěn)定等問題。

目前，我國首個(gè)適用于乳制品中乳鐵蛋白含量測定的國家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乳鐵蛋白的測定》(GB 5009.299-2024)^[7]已開始施行——試樣中的牛乳鐵蛋白經(jīng)磷酸鹽緩沖液提取, 肝素親和柱富集凈化后, 反相高效液相色譜柱分離, 紫外檢測器于280 nm 處檢測, 外標(biāo)法定量。

針對該檢測，島津可提供全套解決方案，包含前處理+色譜柱+通用耗材，詳情點(diǎn)擊國抽方案｜食品中乳鐵蛋白的測定

· 參考資料 ·

[1]國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評估中心/spaqbz/cjwtjd/spaqgjbzcjwtjd/index.shtml

[2] Cox T M, Mazurier J, Spik G, et al. Iron binding proteins and influx of irom across the duodenal brush border: Evidence for specific lactotransferrin receptors in the human intestine [J]. Biochimica et Biophysica Acta: BBA-General Subjects, 1979, 588(1), 120-128.

[3] Superti F, Agamennone M, Pietrantoni A, et al. Bovine lactoferrin prevents influenza A virus infection by interfering with the fusogenic function of viral hemagglutinin [J]. Viruses, 2019, 11(1): 51.

[4] Gibbons J A, Kanwar R K, Kanwar J R. Lactoferrin and cancer in different cancer models [J]. Frontiers in Bioscience: Scholar Edition, 2011, 3(3): 1080-1088.

[5] Cornish J. Lactoferrin promotes bone growth [J]. BioMetals, 2004, 17(3): 331-335.

[6] GB 14880-2012 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑使用標(biāo)準(zhǔn)

[7] GB 5009.299-2024 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乳鐵蛋白的測定

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