凍干外泌體誘導(dǎo)膠原化和抗衰老及凍干要點(diǎn)要點(diǎn)
凍干外泌體誘導(dǎo)膠原化和抗衰老:皮膚紫外線損傷是皮膚老化過(guò)程中紫外線損傷的累積,是內(nèi)源性衰老與紫外線輻射相互作用的結(jié)果,具有組織解體、碎裂和膠原束分散等特征?;|(zhì)金屬蛋白酶 (MMP) 可特異性降解幾乎所有細(xì)胞外基質(zhì) (ECM) 成分,并在皮膚光老化中發(fā)揮重要作用。光老化會(huì)逐漸損害人真皮成纖維細(xì)胞 (HDF) 的功能,后者會(huì)在真皮中產(chǎn)生膠原蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源的外泌體(iPSCs-Exo) 可以增加光老化 HDFs 中 I 型膠原蛋白的表達(dá)水平,降低 SA-β-Gal、MMP-1/3 的表達(dá)水平,恢復(fù)衰老 HDFs 中 I 型膠原蛋白的表達(dá)。外泌體通過(guò)冷凍干燥技術(shù),在低溫低壓下移除水分,從液態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楣虘B(tài)粉末,在長(zhǎng)期儲(chǔ)存中保持其生物活性和結(jié)構(gòu)完整性。
外泌體凍干時(shí)的關(guān)鍵要點(diǎn):1. 要制備高純度、高濃度的外泌體溶液;2.選擇凍干保護(hù)劑時(shí)通常使用1%-5% (w/v) 的海藻糖溶解在PBS或無(wú)酶水中。優(yōu)化配方需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定3. 預(yù)凍終點(diǎn)溫度必須低于樣品的共晶點(diǎn)或玻璃化轉(zhuǎn)變溫度,確保凍結(jié)。通常需要維持在-40°C以下數(shù)小時(shí)。4.外泌體品溫度與擱板溫度接近,且冷凝器捕獲的水分不再顯著增加時(shí),表明一次干燥基本完成;5.外泌體的凍干后的制品的殘留水分是關(guān)鍵指標(biāo),一般需要控制在1%-3%之間。水分過(guò)高會(huì)影響穩(wěn)定性,過(guò)低可能導(dǎo)致過(guò)度干燥而失活;6. 密封后的凍干粉應(yīng)在-20°C或-80°C的干燥、避光環(huán)境中長(zhǎng)期保存。
具有成熟的外泌體凍干工藝技術(shù),可提供上下游的外泌體凍干技術(shù),包括提供外泌體凍干保護(hù)劑篩選,凍干工藝優(yōu)化,凍干放大生產(chǎn)。
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