細胞鑒定過程中性別鑒定的AMEL基因
細胞STR鑒定
細胞鑒定的目標是確認細胞的身份真實性,排除交叉污染。細胞 STR(短串聯(lián)重復(fù)序列)鑒定是目前國際通用的細胞系身份認證標準,通過分析這些STR 位點信息,確認細胞系真實性、排除交叉污染(如 HeLa 細胞污染),從而為科研領(lǐng)域、生物制藥領(lǐng)域、臨床應(yīng)用提供可靠的細胞身份保障,保障數(shù)據(jù)的準確性和可復(fù)制性,保障生產(chǎn)的安全性。
性別鑒定的應(yīng)用場景
性別鑒定在個體識別、親子鑒定、刑事偵察中有著非常重要的作用。特別面對微量檢材、陳舊檢材時對鑒定方法的要求更高,需要檢測方法適合微量取材、檢測方法更準確、更靈敏和更快速。
性別鑒定的檢測方案
1)細胞學(xué)染色法進行性別鑒定方案
可采用染色法進行性別鑒定。人類體細胞中含有23對常染色體和1對性染色體,一對性染色體即X染色體和Y染色體。一般來說,女性有2條X染色體,男性為1條X和1條Y染色體??刹捎眉毎囵B(yǎng)、吉姆薩方法染色,根據(jù)染色體上的帶紋可識別染色體,進行性別鑒定,這種檢測方法結(jié)果直觀、易于判讀,但是檢測時耗時、成本高。
2)利用分子生物學(xué)法進行DNA檢測判斷性別
當前有一種高效、靈敏、準確度高、操作簡單的性別鑒定方案,就是DNA分子檢測,其中PCR擴增是相對簡單的檢測方案,如:單純擴增Y染色體特異性DNA、同時擴增X及Y染色體同源DNA片段、同時擴增X、Y染色體特異性片段鑒定性別。如果只擴增Y染色體特異性序列時,可能會因為擴增失敗導(dǎo)致假陰性。
同時擴增X及Y染色體同源DNA片段是一種有效的手段,目前常見的基因有兩個:ZF基因和AMEL基因。ZF是鋅指狀蛋白基因,AMEL基因編碼牙釉質(zhì)蛋白。這兩個基因均是X、Y染色體同源的基因。通過擴增含有差異序列的片段,來區(qū)分X和Y染色體。
鋅指狀蛋白基因(zine finger protein gene,ZF)是X和Y染色體的同源基因,但是3’序列略有差異,用特異性引物進行擴增時可產(chǎn)生不同的片段,女性只產(chǎn)生一條片段,男性可產(chǎn)生2條片段。
Amelogenin(AMEL)基因是另外一個性染色體同源的基因,編碼一種牙釉質(zhì)蛋白,AMEL 基因的致病性突變會導(dǎo)致牙釉質(zhì)發(fā)育不全。利用AMEL-X和AMEL-Y序列的差異可以進行性別鑒定。AMEL-X和AMEL-Y有很高的同源性,X染色體AMEL內(nèi)含子1中有6 bp丟失,第5外顯子有3 bp的缺失,可針對性設(shè)計特異性引物序列,產(chǎn)物片段大小不同,可用于區(qū)分不同性別。
基于ZF和AMEL基因的PCR檢測方法簡便、靈敏、快捷,實踐中具有較高的應(yīng)用價值。
細胞鑒定中性別鑒定的檢測方案
目前很多的細胞鑒定數(shù)據(jù)庫中的性別鑒定位點選擇的都是AMEL基因,因為擴增片段長度比較短,對于一些存在裂解的樣本也能很好的完成檢測。常用的細胞鑒定數(shù)據(jù)庫中將AMEL基因作為性別鑒定基因,同時檢測CSF1PO、D5S818、D7S820、D13S317、D16S539、TH01、TPOX、vWA等STR位點,不同的細胞品系可以同數(shù)據(jù)庫中的信息進行比對來確定細胞身份。
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