試劑：分離緩沖液A、分離緩沖液B、分離緩沖液C、再生液；衍生緩沖液，茚三酮試劑，清洗液；樣本稀釋液。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：17種氨基酸混標(biāo)（L-天冬氨酸，L-蘇氨酸，L-絲氨酸，L-谷氨酸，L-脯氨酸，甘氨酸，L-丙氨酸，L-胱氨酸，L-纈氨酸，L-蛋氨酸，L-異亮氨酸，L-亮氨酸，L-酪氨酸，L-苯丙氨酸，L-賴氨酸，L-組氨酸，L-精氨酸）（1.00 µmol/mL溶于0.1 mol/L HCl, 1mL），購自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所；L-天冬酰胺（阿拉丁，純度98 %）；L-谷氨酰胺（上海安譜璀世標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，純度99.8 %）；γ-氨基丁酸（阿拉丁，純度≥99 %）；茶氨酸（阿拉丁，純度98 %）。

樣品：xx牌龍井綠茶，xx牌茉莉花茶，xx牌紅茶袋泡茶。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 nmol/mL）：取1.00 µmol/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液用樣本稀釋液稀釋，配制成濃度為100 nmol/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線配制：取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用樣本稀釋液稀釋，分別得到濃度5 nmol/mL、10 nmol/mL、25 nmol/mL、50 nmol/mL、100 nmol/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液供液相色譜測(cè)定。

準(zhǔn)確稱取樣品約2.0 g（精確至0.0001g）于250 mL錐形瓶中，加入200 mL沸水沖泡，95 ℃水浴加熱，每隔5 min混勻一次，提取10 min后取出，趁熱抽濾，濾液冷卻至室溫后，用水定容至250 mL，混勻后取適量樣品溶液，0.45 µm水相濾膜過濾后待測(cè)。

色譜柱：除氨柱：Lotus-AAA-除氨柱 4.0 mm*50 mm

分析柱：Lotus-AAA-色譜柱 4.6 mm*150 mm

進(jìn)樣量：50 µL

梯度洗脫：時(shí)間程序見表1。

檢測(cè)波長(zhǎng)：一級(jí)氨基酸570 nm，二級(jí)氨基酸（脯氨酸）440 nm。

表 1 梯度洗脫時(shí)間程序

本應(yīng)用中的21種氨基酸峰形良好，分離度高，標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖如圖1和圖2所示。

圖1 一級(jí)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖（570 nm）

圖2 二級(jí)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖（440 nm）

依次將標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按濃度從低到高進(jìn)樣，以不同濃度點(diǎn)為橫坐標(biāo)，以每個(gè)濃度點(diǎn)下氨基酸峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。各氨基酸在線性范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)均大于 0.9998。

表1 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果表

同一濃度的21種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，保留時(shí)間RSD%均小于0.4%，峰面積RSD%均小于1.0%，滿足氨基酸測(cè)定要求。

表 2 氨基酸精密度結(jié)果表

分別對(duì)xx牌紅茶袋泡茶、xx牌龍井綠茶和xx牌茉莉花茶進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果見表3。

圖3 紅茶袋泡茶樣品譜圖

圖4 龍井綠茶樣品譜圖

圖5 茉莉花茶樣品譜圖

表3 樣本測(cè)試結(jié)果表