超高效液相色譜 - 紫外檢測(cè)器為你揭秘甲醛含量的真相
在化妝品中,甲醛的存在是有可能的。它通常以微量形式存在,主要來(lái)源于防腐劑的釋放,而不是直接添加。根據(jù)法規(guī)要求,化妝品中甲醛的允許濃度為0.2%。雖然在合規(guī)范圍內(nèi)使用的甲醛致癌風(fēng)險(xiǎn)較低,但仍可能對(duì)某些人群產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。此外,一些牙膏中也添加了甲醛釋放體,在特定的條件下會(huì)緩慢釋放出甲醛。雖然含量微小,但長(zhǎng)期使用仍可能對(duì)身體造成損害。因此應(yīng)盡量選含甲醛少或者不含甲醛的化妝品和牙膏。
本應(yīng)用參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版,對(duì)某品牌化妝水和牙膏分別進(jìn)行了柱前衍生和柱后衍生兩種方法的甲醛測(cè)定,并進(jìn)行了兩種方法的對(duì)比。
P60輸液泵、A50CV自動(dòng)進(jìn)樣器、C10V2柱溫箱、D10紫外檢測(cè)器、R10柱后衍生裝置

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:準(zhǔn)確量取甲醛標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量于10 mL 容量瓶中,加乙腈水溶液稀釋至刻度,搖勻,得到濃度為1.04 mg/mL的儲(chǔ)備液。
標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制:將甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用乙腈水分別配制成1.3 μg/mL、2.6 μg/mL、5.2 μg/mL、10.4 μg/mL、52 μg/mL、104 μg/mL、130 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列液。配制好后,各取甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列溶液1 mL,加入2 mL水,渦旋2 min,使混勻,5000 r/min離心5 min,精密量取上清液1 mL置于10 mL 離心管中,加2,肼鹽酸溶液0.4 mL,渦旋1 min,靜置 2 min,加磷酸緩沖液0.4 mL,加*溶液約1.9 mL調(diào)至中性,渦旋10 s,然后加4 mL,渦旋3 min,離心(5000 r/min)5 min,取層溶液1 mL置于離心管中,氮吹吹干后加入1 mL甲醇,溶解,離心(5000 r/min)5 min,取上清液作為待測(cè)液。
樣本前處理:稱取0.2 g(精確到0.0001g)的牙膏或化妝品樣品,加乙腈水溶液定容至2 mL,渦旋2 min,使混勻,5000 r/min離心5 min,精密量取上清液1 mL置于5mL離心管中,加水2 mL,渦旋30 s,必要時(shí)離心(5000 r/min)5min,精密量取上清液1 mL置于10 mL 離心管中,加2,肼鹽酸溶液0.4 mL,渦旋1 min,靜置2 min,加磷酸緩沖液0.4 mL,加*溶液約1.9 mL調(diào)至中性,渦旋10 s,然后加4 mL,渦旋3 min,離心(5000 r/min)5min,取層溶液1 mL置于離心管中,氮吹吹干后加入1 mL甲醇,溶解,離心(5000 r/min)5 min,取上清液作為樣品待測(cè)溶液。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:準(zhǔn)確量取甲醛標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量于10 mL容量瓶中,用磷酸溶液稀釋至刻度,搖勻,得到濃度為500 μg/mL的儲(chǔ)備液。
標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制:分別量取一定量甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL的甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。
樣本前處理:稱取0.2 g(精確到0.0001g)的牙膏或化妝品樣品于10 mL的具塞比色管中,用磷酸溶液定容至刻度。渦旋 1 min,5000 r/min離心5 min,上清液經(jīng)0.45 μm水相濾膜過(guò)濾(必要時(shí)上清液加10 mL二氯甲烷,振蕩,靜置分層,上清液經(jīng)0.45 μm水相濾膜過(guò)濾)。
色譜柱:Lotus C18(4.6*250 mm,5 μm)
柱溫:30 ℃
進(jìn)樣體積:10 μL
波長(zhǎng):355 nm
流動(dòng)相A:超純水 流動(dòng)相B:甲醇
柱前衍生梯度表:

色譜柱:Lotus AQ C18(4.6*250 mm,5 μm)
柱溫:30 ℃
進(jìn)樣體積:10 μL
波長(zhǎng):420 nm
流動(dòng)相:0.2 %磷酸水溶液
流速:1.0 mL/min


圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖(左圖:柱前衍生;右圖:柱后衍生)
按照標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度由低到高依次進(jìn)樣,以不同濃度為橫坐標(biāo),以每個(gè)濃度甲醛衍生物峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。甲醛衍生物在線性范圍內(nèi),線性相關(guān)系數(shù)均大于0.9999。
表1 甲醛標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果表

同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣6次,甲醛保留時(shí)間RSD%均小于0.07%,峰面積RSD%小于0.98%。
表2 甲醛重復(fù)性結(jié)果表

甲醛檢出限和回收率結(jié)果見(jiàn)表3,在牙膏樣品中添加一定濃度的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液計(jì)算加標(biāo)回收率,加標(biāo)回收率范圍為100.56 %~103.00 %。


圖2 牙膏樣品加標(biāo)回收色譜圖(左圖:柱前衍生;右圖:柱后衍生)
表3 檢出限、回收率結(jié)果表

本應(yīng)用案例使用科諾美Leaps超高效液相色譜—紫外檢測(cè)器,柱前衍生和柱后衍生分別測(cè)定甲醛含量,兩種方法線性關(guān)系良好,線性相關(guān)系數(shù)均大于0.9999。實(shí)際樣品牙膏兩種衍生方法的加標(biāo)回收率均在100.56 %~103.00 %之間,化妝品水的回收率范圍在101.20 %~101.79 %之間。柱前衍生和柱后衍生的檢出限分別為10 mg/kg和30 mg/kg,均符合《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》要求。柱前衍生法由于衍生條件和衍生試劑的選擇更優(yōu),因此其檢出限更低,但由于需要人工進(jìn)行衍生操作,容易引入人為誤差。柱后衍生法自動(dòng)化程度更高,檢測(cè)結(jié)果更穩(wěn)定。
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