伯樂(lè)1658003（通常指Mini-PROTEAN Tetra Cell系列）是實(shí)驗(yàn)室常用的垂直電泳槽。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作流程為你整理了完整、可直接使用的詳細(xì)步驟。

一、伯樂(lè)1658003 小型垂直電泳槽標(biāo)準(zhǔn)操作流程

1、準(zhǔn)備工作

耗材與試劑：

制膠玻璃板（1.0mm或1.5mm厚，短板+帶邊條的短板/長(zhǎng)板）

配套的梳子（1.0mm或1.5mm，10孔/15孔）

制膠架、制膠底座、海綿墊（通常在制膠架上）

電泳緩沖液（Tris-Glycine SDS Running Buffer，即TGS）

蛋白樣品、預(yù)染Marker、上樣緩沖液

電泳儀電源

二、伯樂(lè)1658003 小型垂直電泳槽制膠步驟

1、清洗與組裝玻璃板

（1）清洗： 用洗潔精清洗玻璃板，尤其是帶邊條的短板（與膠接觸面），自來(lái)水沖凈后，用蒸餾水潤(rùn)洗。自然晾干或用無(wú)屑紙巾擦干，確保無(wú)殘留膠漬和水漬。

（2）組裝：

將長(zhǎng)板（無(wú)磨砂邊）平放在桌面上。

將短板（有磨砂邊/帶邊條）對(duì)齊疊放在長(zhǎng)板上（底部和兩側(cè)對(duì)齊）。

將對(duì)齊的玻璃板放入制膠夾中（綠色夾子，通常有左右之分），玻璃板的底邊必須水平且卡在夾子的底部膠條上。

用力捏緊制膠夾，將其垂直安插在制膠架上。

2、配制分離膠與灌膠

（1）根據(jù)目標(biāo)蛋白大小配制相應(yīng)濃度的分離膠（下層膠），最后加入TEMED并迅速混勻。

（2）用移液槍或滴管吸取分離膠，從玻璃板一側(cè)邊緣緩慢注入，避免產(chǎn)生氣泡。

（3）灌至綠色制膠夾下沿（或距短板上沿約1.5-2cm處）。

（4）在膠面上輕輕加入一層水、乙醇或異丙醇?jí)浩揭好娌⒏艚^空氣。

（5）靜置約20-30分鐘，直至凝膠與水層之間出現(xiàn)一條清晰的折光線(xiàn)，倒掉上層液體，用濾紙條吸干殘留水分。

3、配制濃縮膠與插梳子

（1）配制濃縮膠（上層膠），混勻后立即灌滿(mǎn)玻璃板剩余空間。

（2）將梳子水平插入濃縮膠中，從一側(cè)向另一側(cè)傾斜插入，避免產(chǎn)生氣泡。

（3）靜置約15-20分鐘，等待濃縮膠凝固。凝固后可立即使用，或用濕潤(rùn)紙巾包裹后放入4℃冰箱保存。

三、 電泳步驟

1、組裝電泳芯與內(nèi)槽

（1）取下制膠架上的玻璃板，將其從制膠夾上取下，沖洗掉多余的殘膠。

（2）準(zhǔn)備電極芯： 將兩塊凝膠玻璃板（短板朝內(nèi)）安裝在電極芯兩側(cè)。

（3）如果是只跑一塊膠，電極芯的另一側(cè)需要用緩沖液擋板（白色塑料板）代替，確保密封。

（4）扣緊： 將電極芯兩側(cè)的夾子扣緊，夾住玻璃板和擋板。

（5）內(nèi)槽檢漏與加液： 將組裝好的電極芯放入電泳槽中。向兩塊玻璃板之間的內(nèi)槽（電極芯內(nèi)部）倒入新鮮的電泳緩沖液，倒?jié)M至溢出。靜置1分鐘觀(guān)察液面是否明顯下降（漏液）。如不漏，必須將內(nèi)槽加滿(mǎn)。

2、上樣

（1）輕輕垂直拔出梳子。

（2）用電泳緩沖液沖洗加樣孔，去除未聚合的凝膠碎片。

（3）上樣： 用微量進(jìn)樣器或槍頭上樣。將槍頭插入加樣孔底部，輕輕打出樣品。緩慢打出，防止樣品沖出孔外。記錄上樣順序。

3、連接電源

（1）在外槽（電泳槽主體）中倒入電泳緩沖液，液面至少淹沒(méi)底部金屬絲。

（2）蓋上蓋子（黑對(duì)黑，紅對(duì)紅）。

（3）連接電源：正極（紅）接紅，負(fù)極（黑）接黑。

（4）設(shè)置參數(shù)：

濃縮膠： 恒壓 80V，約20-30分鐘（樣品跑成一條細(xì)線(xiàn)并進(jìn)入分離膠）。

分離膠： 恒壓 120-150V，約40-60分鐘。

（5）電泳至溴酚藍(lán)（藍(lán)色染料）到達(dá)玻璃板底部邊緣時(shí)，停止電泳。

四、 拆膠與后續(xù)

1、斷電： 先關(guān)電源，拔掉電源線(xiàn)，取下蓋子。

2、倒液： 倒掉電泳緩沖液。

3、取板： 取出電極芯，打開(kāi)夾子，取出玻璃板。

4、撬膠： 使用撬膠板（塑料刮片）在玻璃板一側(cè)輕輕撬開(kāi)。通常長(zhǎng)板較易分離。切掉濃縮膠，將分離膠小心剝下放入染色液中進(jìn)行后續(xù)考馬斯亮藍(lán)染色或轉(zhuǎn)膜操作。

五、 常見(jiàn)問(wèn)題與排查

1、漏膠：

（1）原因1：玻璃板底部未對(duì)齊。

（2）原因2：制膠架底部的海綿墊老化變硬。解決方案： 取少量1%瓊脂糖凝膠融化后，在玻璃板底部四周封邊。

2、電泳時(shí)條帶呈“微笑”或“皺眉”：

（1）微笑（兩邊慢中間快）： 通常是凝膠溫度過(guò)高，建議降低電壓或在冰浴中進(jìn)行。

（2）皺眉（兩邊快中間慢）： 通常是內(nèi)槽緩沖液泄漏導(dǎo)致液面低于短板。這是1658003常見(jiàn)的錯(cuò)誤！ 務(wù)必保證內(nèi)槽液面是滿(mǎn)的，外槽液面只需沒(méi)過(guò)電極絲即可，不要加得太滿(mǎn)導(dǎo)致內(nèi)外壓力不平衡。

3、跑得極慢：

檢查緩沖液是否誤配成非SDS的緩沖液（如TAE/TBE，那是核酸電泳用的），或緩沖液過(guò)度稀釋。