三、預(yù)期用途 日本乙型腦炎又名流行性乙型腦炎是由日本乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）引起的一種急性人獸共患傳染病?？梢鹭i乙型腦炎，主要特征為高熱、流產(chǎn)、死胎和公豬睪丸炎。

本試劑盒用于檢測豬血清、血漿中豬乙型腦炎病毒抗體，可用于豬乙型腦炎病毒疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。

四、試劑盒原理

   本試劑盒系由預(yù)包被豬乙型腦炎病毒重組E2蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬乙型腦炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬乙型腦炎病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬乙型腦炎病毒抗體。

五、試劑盒組成

酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照

六、儲(chǔ)存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。

包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

七、適用儀器   含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

操作步驟

一、樣品準(zhǔn)備

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，*需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對(duì)照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

二、檢驗(yàn)方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

結(jié)果分析

一、參考值

實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照≤0.10，陽性對(duì)照≥0.6。

二、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

1.樣品A值≥0.38為陽性；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性。

2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性或可疑時(shí)表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。