白色擬諾卡氏菌的培養(yǎng)方法與實(shí)驗(yàn)操作步驟！

白色擬諾卡氏菌的培養(yǎng)方法與實(shí)驗(yàn)操作步驟！

白色擬諾卡氏菌是Nocardiopsis屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。主要用途為研究，具體用途為生物活性微生物：抗菌活性譜:枯草芽孢桿菌 -- 大腸埃希氏菌 -- 熒光假單胞菌 -- 白假絲酵母 -- 宛氏擬青霉。

一、菌種簡(jiǎn)介

平臺(tái)編號(hào)：Bio-03021

提供形式：凍干物

拉丁屬名：Nocardiopsis Alba

中文譯名：白色擬諾卡氏菌

拉丁學(xué)名：Nocardiopsis alba

原始編號(hào)：173101

菌株來源：←河北大學(xué)

保藏人：張利平

直接來源國家：中國

保藏時(shí)間：9/3/2008

其他保藏編號(hào)

生物危害：四類

模式菌株：非模式菌株

培養(yǎng)溫度：28℃

培養(yǎng)基：0012    

分離源：柏樹棕土壤

采集地點(diǎn)：遼寧省大連白玉山

采集國家：中國

用途：研究

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）

二、形態(tài)特征

與模式菌株Nocardiopsis alba DSM 43377(T)相似性為 99.793%；在2216E平板上25℃生長(zhǎng)5天，菌落白色，微凸起，表面毛狀，邊緣有暈，直徑0.3-1mm。

三、微生物培養(yǎng)方法

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對(duì)菌落計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜，對(duì)平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。

四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查

2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物

3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查

4、過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌

五、保存方法

1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。

2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

3、懸液保存法：

①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

4、載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

5、常用的冷凍保存法：

①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍的微生物保存法。

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