二維Western印跡法HCP抗體覆蓋率分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在生物藥開(kāi)發(fā)過(guò)程中，宿主細(xì)胞蛋白（Host Cell Proteins, HCPs）作為工藝相關(guān)雜質(zhì)，是影響藥物安全性、免疫原性和穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素之一。為了準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)HCP殘留量，業(yè)界普遍采用ELISA進(jìn)行定量檢測(cè)。但由于ELISA依賴于抗-HCP多克隆抗體的識(shí)別能力，抗體覆蓋率（Coverage）成為決定其有效性與可靠性的核心指標(biāo)。二維Western印跡法（2D-Western blot）作為當(dāng)前gōngrèn的抗體覆蓋率驗(yàn)證金標(biāo)準(zhǔn)方法可有效進(jìn)行HCP抗體覆蓋率分析，可直觀揭示抗體對(duì)HCP種類的識(shí)別能力。

一、二維Western印跡法的基本原理

1、二維Western印跡法技術(shù)組成

（1）dìyī維分離：等電聚焦（IEF）

蛋白在pH梯度膠中根據(jù)等電點(diǎn)（pI）進(jìn)行分離，實(shí)現(xiàn)“橫向”分辨

（2）第二維分離：SDS-PAGE

將dìyī維條帶放入垂直電泳體系中，依據(jù)分子量進(jìn)一步“縱向”分離

2、Western轉(zhuǎn)印與抗體檢測(cè)

（1）將分離后的蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜

（2）用抗-HCP多抗進(jìn)行孵育，再用HRP標(biāo)記二抗顯色或化學(xué)發(fā)光檢測(cè)

（3）通過(guò)與Coomassie染色圖譜對(duì)比，可判斷抗體識(shí)別的蛋白點(diǎn)數(shù)和區(qū)域

二、二維Western印跡用于HCP抗體覆蓋率分析流程

1、樣品準(zhǔn)備

（1）HCP樣品來(lái)源需明確：一般建議使用表達(dá)系統(tǒng)早期裂解物或中期發(fā)酵液

（2）蛋白濃度控制在1–2 mg/mL，確保圖譜清晰、點(diǎn)位豐富

2、電泳與轉(zhuǎn)印

（1）dìyī維使用預(yù)制IPG膠條（pH 3–10或窄梯度如pH 4–7）進(jìn)行等電聚焦

（2）第二維使用12–15% SDS-PAGE凝膠，分辨中低分子量HCP

（3）轉(zhuǎn)膜推薦使用濕轉(zhuǎn)法，轉(zhuǎn)印效率更高

3、膜染色與顯色

（1）一張膜用Coomassie藍(lán)或銀染作為總蛋白圖譜參考

（2）另一張膜進(jìn)行Western檢測(cè)，顯色后掃描分析

4、圖像對(duì)比與覆蓋率計(jì)算

（1）通過(guò)圖像分析軟件（如 ImageMaster 2D、PDQuest）比對(duì)蛋白點(diǎn)位

（2）計(jì)算公式：Coverage (%) = (抗體識(shí)別點(diǎn)數(shù) / 總蛋白點(diǎn)數(shù)) × 100%

（3）若覆蓋率低于70%，通常需優(yōu)化免疫原策略或更換抗體批次

三、二維Western印跡法的優(yōu)勢(shì)與局限

1、二維Western印跡法核心優(yōu)勢(shì)

（1）分辨率高：同時(shí)根據(jù)pI與分子量進(jìn)行分離，點(diǎn)位識(shí)別精度高

（2）圖像直觀：覆蓋率計(jì)算基于清晰可視的蛋白點(diǎn)，便于評(píng)估抗體性能

（3）質(zhì)量監(jiān)管認(rèn)可：被FDA、EMA視為HCP抗體驗(yàn)證推薦方法之一

（4）適用于早期篩選與質(zhì)控環(huán)節(jié)

2、二維Western印跡法存在挑戰(zhàn)

（1）操作流程復(fù)雜，技術(shù)依賴性強(qiáng)

（2）低豐度蛋白易被掩蓋，可能低估覆蓋率

（3）圖譜匹配存在一定主觀判斷成分，依賴經(jīng)驗(yàn)豐富的圖像分析人員

（4）不具備定量能力，需與ELISA或MS結(jié)合使用

四、二維Western印跡法 vs 其他覆蓋率評(píng)估技術(shù)

高質(zhì)量的HCP抗體是構(gòu)建穩(wěn)定ELISA平臺(tái)的基礎(chǔ)，而二維Western印跡作為抗體覆蓋率的“金標(biāo)準(zhǔn)”，為其性能評(píng)估提供了可視化、可量化的科學(xué)依據(jù)。對(duì)生物藥開(kāi)發(fā)者而言，選擇合適的抗體并驗(yàn)證其覆蓋能力，是保障產(chǎn)品安全性與合規(guī)性的關(guān)鍵一步。百泰派克生物科技將持續(xù)優(yōu)化抗體驗(yàn)證流程與數(shù)據(jù)分析能力，助力生物藥研發(fā)企業(yè)加速質(zhì)控平臺(tái)構(gòu)建，提升產(chǎn)品監(jiān)管一致性與國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白zhìzǔxué

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種蛋白zhìzǔxué分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)*，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

二維Western印跡法HCP抗體覆蓋率分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹