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胞內(nèi)出現(xiàn)顆?；蚩张?。

細胞內(nèi)如果出現(xiàn)顆粒物質(zhì)，表明細胞處于非健康狀態(tài)。

同樣，細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡也說明細胞處于非健康狀態(tài)。

產(chǎn)生空泡可能是老化或是細胞狀態(tài)不好。

如果發(fā)生在單層細胞：一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征（相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環(huán)），則提示該細胞已經(jīng)死亡，即zui終干枯死亡。

如果發(fā)生在懸浮細胞：正常懸浮細胞清晰透明，如胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒或變渾濁表明細胞受損，甚至死亡。

怎樣去除死細胞？單層培養(yǎng)的細胞死亡后，一般會漂浮起來，因此不需要特殊處理。

而懸浮細胞或原代培養(yǎng)細胞則要通過密度離心（如Ficoll梯度）方法收集死細胞。

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 復蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。

懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

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