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| 參考價(jià) | ¥1469-¥17381 |
參考價(jià):¥1469 ~ ¥17381
500U 2000U 10000U
供貨周期:現(xiàn)貨 規(guī)格:500U/2000U/10000U 貨號:abs60152 應(yīng)用領(lǐng)域:化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥,綜合 主要用途:1、體內(nèi)或體外翻譯前 mRNA 的加帽; 2、mRNA 的 5'末端標(biāo)記。
>| 500U | 1469元 | 999U可售 |
| 2000U | 4511元 | 999U可售 |
| 10000U | 17381元 | 999U可售 |
更新時(shí)間:2025-11-21 14:28:09瀏覽次數(shù):2411評價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 500U/2000U/10000U |
|---|---|---|---|
| 貨號 | abs60152 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥,綜合 |
| 主要用途 | 1、體內(nèi)或體外翻譯前 mRNA 的加帽; 2、mRNA 的 5'末端標(biāo)記。 |
| 產(chǎn)品描述 | |||||||||||||||||||||||||
| 描述 | 牛痘病毒加帽mei,來源于攜帶牛痘病毒 MR的重組大腸桿菌菌株,由 D1R 和 D12L 兩個(gè)亞基組成,兼具三種酶活性(RNA 三磷酸酶活性、鳥苷酸轉(zhuǎn)移酶活性和niao嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶活性)。牛痘病毒加帽mei是催化形成帽子結(jié)構(gòu)的有效酶,能特異性地將 7-甲基鳥苷酸帽子結(jié)構(gòu)(m7Gppp,Cap 0) 加至 RNA 的 5'端。帽子結(jié)構(gòu)(Cap 0)對真核生物 mRNA 的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)和翻譯有著重要的作用。通過酶促反應(yīng)給RNA 加帽是一種有效簡單的方法,能顯著改善用于體外轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)染和顯微注射的 RNA 的穩(wěn)定性和翻譯能力。
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| 來源 | 攜帶牛痘病毒MR的重組大腸桿菌 | ||||||||||||||||||||||||
| 應(yīng)用 | 1、體內(nèi)或體外翻譯前 mRNA 的加帽; 2、mRNA 的 5'末端標(biāo)記。 | ||||||||||||||||||||||||
| 純度 | ≥90% | ||||||||||||||||||||||||
| 使用方法 | 反應(yīng)體系和條件: 1、加帽反應(yīng)(反應(yīng)體系 20 μL) 本實(shí)驗(yàn)步驟適用于 10μg RNA(≥ 100 nt)的加帽反應(yīng),可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大: (1)取 10 μg RNA 至 1.5 mL 離心管中,使用無核酸酶水稀釋至 15 μL; (2)65℃加熱 5 min,然后取出冰浴 5 min 完成變性; (3)根據(jù)下表配制加帽體系
*10×加帽緩沖劑:0.5 M Tris-HCl, 50 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, (25℃, pH 8.0) (4)37℃孵育 30 min, RNA 加帽完成,可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2、5'末端標(biāo)記反應(yīng)(反應(yīng)體系 20 μL) 本實(shí)驗(yàn)步驟適用于 5'末端帶有三磷酸的RNA 標(biāo)記,且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大,其標(biāo)記效率受反應(yīng)體系中 RNA 與 GTP 摩爾濃度比以及 RNA 樣本中 GTP 含量的影響: (1)取適量的 RNA 至 1.5 mL 離心管中,使用無核酸酶水稀釋至 14 μL; (2)65℃加熱 5 min,然后取出冰浴 5 min,完成變性; (3)根據(jù)下表配制 5'末端標(biāo)記反應(yīng)體系:
** GTP mix 為 GTP 和少量標(biāo)記物,其中GTP 使用濃度參照注意事項(xiàng) 3。 | ||||||||||||||||||||||||
| 儲(chǔ)存/保存方法 | -20℃以下保存,避免反復(fù)凍融或頻繁暴露于溫度變化中,shou次使用時(shí)建議進(jìn)行分裝。 | ||||||||||||||||||||||||
| 技術(shù)指標(biāo) | 質(zhì)量控制: | ||||||||||||||||||||||||
| 注意事項(xiàng) | 1、反應(yīng)前熱處理 RNA,去除轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 5'末端的二級結(jié)構(gòu),若已知 RNA 5'末端的結(jié)構(gòu)復(fù)雜,可以延長反應(yīng)時(shí)間至 60 min,以提高加帽效率; 2、用于加帽反應(yīng)的 RNA 在使用之前應(yīng)進(jìn)行純化并溶解于無核酸酶水。溶液中不能含有EDTA 和鹽; 3、5'末端標(biāo)記反應(yīng)體系中, GTP 儲(chǔ)液應(yīng)稀釋為反應(yīng)體系中 mRNA 摩爾濃度的 1-3 倍; 4、反應(yīng)體系體積可根據(jù)實(shí)際需求按比例進(jìn)行放大或縮小。 | ||||||||||||||||||||||||
| 參考文獻(xiàn) | |||||||||||||||||||||||||
| 參考文獻(xiàn) | [1] Mao X, Shuman S. Intrinsic RNA (guanine-7) methyltransferase activity of the vaccinia virus capping enzyme D1 subunit is stimulated by the D12 subunit. Identification of amino acid residues in the D1 protein required for subunit association and methyl group transfer. J Biol Chem. 1994;269(39):24472-24479. PMID: 7929111 [2] Grudzien E, Stepinski J, Jankowska-Anyszka M, Stolarski R, Darzynkiewicz E, Rhoads RE. Novel cap analogs for in vitro synthesis of mRNAs with high translational efficiency. RNA. 2004;10(9):1479-1487. PMID: 15317978 [3] Ramanathan A, Robb GB, Chan SH. mRNA capping: biological functions and applications. Nucleic Acids Res. 2016;44(16):7511-7526. PMID: 27317694 | ||||||||||||||||||||||||
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