產(chǎn)品簡介: 

該產(chǎn)品是我們研發(fā)團(tuán)隊在貼壁細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑的基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化研發(fā)成功的專門用于懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的試劑。它具有非常zhuo越的轉(zhuǎn)染性能，可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率在懸浮細(xì)胞中可高達(dá)85%以上（巨噬細(xì)胞、EGFP質(zhì)粒）。與目前市場上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同，它采用生物可降解材料配制，對細(xì)胞的毒性很低，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡率不到10%。其使用也非常方便，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡便。

產(chǎn)品特點：

 1、zhuo越的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)85%以上；

 2、極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對實驗結(jié)果的影響，實驗結(jié)果更為客觀；

3、操作簡便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液。

操作步驟 （以24 孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A、 細(xì)胞接種:

1、 轉(zhuǎn)染前一天或者兩天接種細(xì)胞，接種細(xì)胞量為2-4×10 5 個。

2、 確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞比活度為90%以上，且生長狀態(tài)良好。

3、 如果細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前一天鋪板，轉(zhuǎn)染時可以不用換液，如果細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，轉(zhuǎn)染時最好換液。

B、 SP/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備(該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染):

1、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul Trans buffer，再加入適量的DNA，見附表。用移液器輕輕混勻成DNA稀釋液。

2、使用前用移液器吹打混勻轉(zhuǎn)染試劑，立即往DNA稀釋液中加入適量的轉(zhuǎn)染試劑，用移液器輕輕混勻。

3、 將SP/DNA復(fù)合物室溫靜置15分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉(zhuǎn)染:

1、將擬轉(zhuǎn)染細(xì)胞強烈振蕩20-40秒，確保培養(yǎng)細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液，無細(xì)胞結(jié)團(tuán)；

2、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板。加完后，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3、 培養(yǎng)24-96小時后收獲。

4、 SP在wan全培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基。因收獲蛋白需要，可以使用懸浮細(xì)胞培養(yǎng)專用的無血清培養(yǎng)基。

附表：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

2-8℃避光保存，Trans buffer可保存于2-8℃有效期一年，使用前請先將本品輕輕混勻。

1、對于24孔板，轉(zhuǎn)染前接種細(xì)胞量以（2-4）x105細(xì)胞為宜，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞生長狀態(tài)應(yīng)保持良好，不要有支原體污染。