限度利用2個不同分離系統(tǒng)，實現(xiàn)全2維分離

全二維液相色譜將兩種獨立的分離系統(tǒng)加以結(jié)合，可大幅度地提高分離性能，是全新的分析方法。通過多個分離系統(tǒng)的組合，可以分離使用一維LC難以分離的成分，為此，可應(yīng)用于復(fù)雜樣品的分析。另外，與一般的二維LC不同，獲取的數(shù)據(jù)反映出第1維與第2維雙方的分離結(jié)果，可限度地應(yīng)用雙方的分離系統(tǒng)。

 

復(fù)雜樣品分離不充分，造成峰重合

將一維分離的成分進一步以第2根色譜柱進行分離， 即使復(fù)雜的樣品也可實現(xiàn)高分離

通常的1維LC與Comprehensive 2D-LC的差異

 

全二維液相色譜將一維系統(tǒng)的洗脫液在二維譜圖上進一步細(xì)致地分割解析，在線連續(xù)地在二維系統(tǒng)實施分離。通過2個環(huán)路的閥構(gòu)成一維與二維系統(tǒng)相交的流路結(jié)構(gòu)，切換閥使這些環(huán)路交替地重復(fù)進行一維洗脫液分割和向二維系統(tǒng)注入的動作。

全二維液相色譜系統(tǒng)的流路與動作

在二維譜圖上解析各成分

全二維液相色譜分析的優(yōu)點不僅僅是高分離。在二維譜圖上，維軸與第二維軸可分別為不同的分離條件，因此，各成分的物性與圖上的位置相關(guān)。在二維譜圖上進行解析，可對具有類似結(jié)構(gòu)的化合物分組，可直接觀察到各成分群，或在圖上解析未知成分的性質(zhì)。

 磷脂39成分的同時分析
PG：磷脂　PE：磷脂酰乙醇胺  PA：磷脂酸
PI：磷脂酰肌醇  PS：磷脂?！C：磷脂酰

磷脂各成分通過第1維正相系統(tǒng)基于極性基團種類進行分離，通過第2維反相系統(tǒng)基于脂肪酸鏈長進行分離。

上圖按種類分組表示各成分。

磷脂有以正離子模式較強檢出的成分和以負(fù)離子模式較強檢出的成分，但利用LCMS-8050的高速正負(fù)離子切換［UFswitching］檢測，可以在1次分析中獲得兩組數(shù)據(jù)。

由擁有性能的Nexera X2構(gòu)筑

為實現(xiàn)全二維液相色譜，要求各構(gòu)成組件具有性能。比如，二維分析系統(tǒng)滿足超快速梯度分析，即高流量且超高壓的送液要求。并且，為了解析樣品間的差異，還要求在上述分析條件下具有非常高的保留時間重現(xiàn)性。 Nexera-e采用具有水平的Nexera X2的各組件，具備充分滿足上述嚴(yán)苛要求的性能。比如，送液單元LC-30AD可至3 mL/min的高流量區(qū)域，并以130 MPa耐壓實施送液。與同樣可耐壓130 MPa的高壓流路切換閥FCV-32AH組合，擴大了二維分析系統(tǒng)的選擇范圍。

Nexera-e 系統(tǒng)（PDA型號）

Nexera-e采用本公司自行開發(fā)的低容量流路切換閥。

全二維液相色譜需要頻繁的切換流路，因此，如果閥的密封因磨損易產(chǎn)生粉末，則可能在分析中造成流路堵塞等，有可能對分析產(chǎn)生重大影響。流路切換閥FCV-32AH采用了在開發(fā)Nexera X2的自動進樣器過程中培育優(yōu)異技術(shù)，排除了這種擔(dān)心。

對于基本上以超快速分析為主的全二維液相色譜來說，檢測器的高速采樣也非常重要。

Nexera X2的光電二極管陣列檢測器SPD-M30A達200 Hz，三重四極桿型質(zhì)譜儀LCMS-8050也通過采用UFMS技術(shù)而實現(xiàn)了超高速掃描，可從容地采集數(shù)據(jù)。

編號	成分	二維保留時間重現(xiàn)性 ［%RSD］
1	Acetanilide	0.43
2	Methyl paraben	0.37
3	Acetophenone	0.66
4	Propyl paraben	0.43
5	Butyrophenone	0.42
6	Benzophenone	0.35
7	Hexanophenone	0.43

標(biāo)準(zhǔn)品分析中各成分的保留時間重現(xiàn)性（n=6）
（1: Acetanilide, 2: Methyl paraben, 3: Acetophenone, 4: Propyl paraben, 5: Butyrophenone, 6: Benzophenone, 7: Hexanophenone)

二維數(shù)據(jù)變換與二維數(shù)據(jù)上的定性?定量解析

數(shù)據(jù)采集所獲得的數(shù)據(jù)通過全二維液相色譜解析軟件ChromSquare變換為二維等高線數(shù)據(jù)。色譜圖上的峰在等高線數(shù)據(jù)上被識別為點，以這個點為單位進行定性·定量解析處理。

磷脂標(biāo)準(zhǔn)樣品的LC×LC/MS數(shù)據(jù)解析
（左上：等高線圖（放大），左下：MS譜圖，右上：第2維的色譜圖，右下：等高線圖（整體）） 

隨著指針的移動，顯示表示MS譜圖。比如，可以對有特征的點簡便地使用MS譜圖進行定性分析。

與通常的HPLC分析相同，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的分析結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線進行未知樣品的定量分析。

※ChromSquare為意大利Chromaleont S.r.l的產(chǎn)品。