植物海藻糖-6-磷酸(T6P)ELISA試劑盒使用說明書

　　BS-8050-A 植物海藻糖-6-磷酸(T6P)ELISA 試劑盒 96T

　　BS-8050-B 植物海藻糖-6-磷酸(T6P)ELISA 試劑盒 48T

　　一、實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測植物組織或細胞中的T6P水平。微孔板預包抗T6P抗體，樣本中T6P與固相抗體結(jié)合后，加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗形成復合物。加入底物TMB顯色，TMB在HRP催化下轉(zhuǎn)化為藍色，酸終止后顯黃色，顯色深度與樣本中T6P濃度呈正相關，于450nm波長測定吸光度計算濃度?。

　　二、試劑盒組成

　　組分 規(guī)格 保存條件

　　預包被微孔板 12孔×8條 2-8℃密封干燥

　　標準品 凍干粉 -20℃復溶后分裝

　　HRP標記檢測抗體 液體 避光2-8℃

　　顯色底物(TMB) A液+B液 現(xiàn)用現(xiàn)配，避光

　　終止液 2M硫酸 室溫

　　濃縮洗滌液 液體 40℃水浴溶解結(jié)晶

　　樣本xishi液 液體 含穩(wěn)定劑

　　注?：不同品牌組分可能存在差異，詳見具體說明書。

　　三、樣本處理

　　1. 樣本類型

　　植物組織?：稱取0.1g組織，加入1mL提取液冰浴勻漿，離心取上清。

　　細胞/細菌?：收集離心后棄上清，超聲破碎細胞提取上清。

　　2. 保存條件

　　短期?：2-8℃保存≤48小時。

　　長期?：分裝后-20℃凍存，避免反復凍融。

　　3. 稀釋建議

　　常規(guī)樣本?：推薦稀釋5-20倍(如取20μL樣本+180μL稀釋液)。

　　高濃度樣本?：需預實驗確定稀釋倍數(shù)，最高稀釋100000倍(三步稀釋法)。

　　四、操作步驟

　　標準品配制?

　　凍干標準品加1mL稀釋液復溶，混勻后靜置10分鐘。

　　進行系列稀釋(如8pmol/L→4pmol/L→…→0.5pmol/L)。

　　加樣?

　　標準孔：50μL/孔。

　　樣本孔：先加40μL稀釋液，再加10μL樣本(總稀釋5倍)。

　　空白孔：不加樣本及二抗。

　　孵育?

　　37℃孵育120分鐘，洗板3次(每次浸泡1分鐘)。

　　顯色與終止?

　　每孔加TMB顯色液100μL，37℃避光孵育15分鐘。

　　加終止液50μL終止反應，30分鐘內(nèi)測OD值。

　　五、注意事項

　　樣本避免?：含疊氮鈉(NaN3)樣本(抑制HRP活性)?。

　　試劑平衡?：使用前室溫平衡20分鐘，濃縮洗滌液需40℃水浴溶解結(jié)晶。

　　質(zhì)量控制?：建議設置復孔，標準曲線R2應≥0.95。

　　六、結(jié)果分析

　　標準曲線?：以OD值對濃度繪制四參數(shù)方程。

　　濃度計算?：樣本OD值代入曲線方程，再乘以稀釋倍數(shù)。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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