來(lái)自結(jié)直腸癌的病人類器官原代培養(yǎng)

時(shí)間：2024/4/19閱讀：1341

一、操作步驟

1.組織 4℃ 條件下從醫(yī)院取回。

2.消毒取樣的 15ml 管，取出組織，放到 10ml 大皿中。

3.用含 4 抗的 PBS 溶液浸泡，清洗組織。

4.再用組織緩沖液浸泡、清洗三遍。
5.將組織剪成 1mm3 大小的組織塊，轉(zhuǎn)移到 15ml 管中消化。

6.在 37℃ 水浴鍋中，消化 15min。

7.取少量液體在顯微鏡下觀察，看到較多的單細(xì)胞和較少的細(xì)胞簇后，終止消化。

8.用 100μm 篩過(guò)濾，然后 300g4℃ 離心 5min，移去上清。

9.重懸沉淀，轉(zhuǎn)移到 2ml 離心管中，300g4℃ 離心 5min，移去上清。

10.估算沉淀的細(xì)胞量，以 1:25 的比例添加基質(zhì)膠，重懸。

11.24 孔板鋪板，冰上操作，每孔點(diǎn)膠 25ul。

12.鋪板后，放到 37℃ 細(xì)胞培養(yǎng)箱中 15min 成膠。

13.然后每孔添加 600ul 結(jié)直腸癌類器官培養(yǎng)基，放到 37℃ 細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

二、結(jié)果展示

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