單克隆抗體生產(chǎn)中的HCP抗體覆蓋率分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在單克隆抗體（monoclonal antibody, mAb）等重組蛋白藥物的大規(guī)模生產(chǎn)過(guò)程中，宿主細(xì)胞蛋白（Host Cell Proteins, HCPs）作為工藝過(guò)程中產(chǎn)生的內(nèi)源性雜質(zhì)，是監(jiān)管部門(mén)高度關(guān)注的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。這些蛋白來(lái)源于表達(dá)系統(tǒng)（如CHO細(xì)胞），可能在細(xì)胞裂解、培養(yǎng)或純化過(guò)程中被攜帶至zuì終制劑中，即便其殘留水平極低，仍可能引發(fā)免疫原性、蛋白降解、藥效干擾或穩(wěn)定性下降等一系列潛在風(fēng)險(xiǎn)。為了監(jiān)測(cè)并控制HCP殘留，目前業(yè)內(nèi)廣泛采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）作為shǒuxuǎn檢測(cè)手段。然而，ELISA的有效性本質(zhì)上取決于所用抗體是否能夠“看見(jiàn)"足夠多的HCP種類(lèi)。因此，在ELISA方法學(xué)驗(yàn)證中，HCP抗體覆蓋率分析（Antibody Coverage Analysis）被視為衡量其適用性和可靠性的重要依據(jù)。

一、單克隆抗體項(xiàng)目需要進(jìn)行抗體覆蓋率驗(yàn)證的原因

1、CHO表達(dá)系統(tǒng)存在HCP背景差異

（1）同為CHO細(xì)胞，不同公司、不同培養(yǎng)基、不同工藝條件下，表達(dá)出的HCP種類(lèi)顯著差異

（2）商業(yè)抗體未必能全面識(shí)別目標(biāo)項(xiàng)目的特定HCP譜

2、申報(bào)資料合規(guī)性要求明確

（1）FDA、EMA、NMPA對(duì)HCP檢測(cè)方法學(xué)驗(yàn)證有嚴(yán)格要求，必須提交抗體覆蓋率數(shù)據(jù)

（2）特別是在使用商業(yè)抗體或平臺(tái)方法時(shí)，更需驗(yàn)證其適配性

3、避免潛在的質(zhì)量盲區(qū)與安全風(fēng)險(xiǎn)

（1）若未被抗體識(shí)別的HCP在終產(chǎn)品中持續(xù)殘留，可能導(dǎo)致免疫原性或穩(wěn)定性問(wèn)題

（2）一旦申報(bào)過(guò)程中被發(fā)現(xiàn)“覆蓋不足"，可能導(dǎo)致方法質(zhì)疑、補(bǔ)充試驗(yàn)或申報(bào)延后

二、單克隆抗體HCP抗體覆蓋率驗(yàn)證的推薦方法

1、二維Western印跡法（2D-Western Blot）

（1）核心原理：通過(guò)二維電泳將總HCP分離后，用待驗(yàn)證抗體顯色識(shí)別其可結(jié)合的蛋白點(diǎn)位

（2）分析方式：將抗體識(shí)別圖譜與染色圖譜比對(duì)，統(tǒng)計(jì)蛋白點(diǎn)位

（3）結(jié)果輸出：覆蓋率（%）= 抗體識(shí)別點(diǎn)數(shù) ÷ 總HCP蛋白點(diǎn)數(shù) × 100%

2、免疫親和富集-質(zhì)譜法（IA-MS）

（1）將抗-HCP抗體偶聯(lián)至磁珠，富集其識(shí)別的蛋白群

（2）經(jīng)酶解+LC-MS/MS鑒定后確認(rèn)蛋白身份，實(shí)現(xiàn)蛋白種類(lèi)層面的覆蓋驗(yàn)證

（3）適合補(bǔ)充確認(rèn)2D-WB的圖譜結(jié)果，或?qū)﹃P(guān)鍵HCP種類(lèi)進(jìn)行深入識(shí)別

3、輔助方法：2D-DIGE & ELISA響應(yīng)比對(duì)

（1）熒光雙染可輔助可視化識(shí)別差異

（2）ELISA響應(yīng)對(duì)比適合初篩，但無(wú)法進(jìn)行定量覆蓋率分析

三、2D-Western在mAb覆蓋率驗(yàn)證中的實(shí)施要點(diǎn)

1、樣品準(zhǔn)備

（1）建議使用中試/臨床樣品中的CHO細(xì)胞裂解液或發(fā)酵中間液

（2）確保HCP樣本具有代表性（體現(xiàn)實(shí)際工藝）

（3）蛋白濃度推薦控制在1–2 mg/mL，利于點(diǎn)位清晰分離

2、實(shí)驗(yàn)流程概覽

（1）dìyī維：等電聚焦（IEF）分離蛋白等電點(diǎn)（pI）

（2）第二維：SDS-PAGE分離分子量

（3）膜轉(zhuǎn)?。阂粡圕oomassie染色記錄總HCP，一張Western顯影記錄抗體識(shí)別部分

（4）圖像比對(duì)與點(diǎn)位統(tǒng)計(jì)：使用軟件如ImageMaster或PDQuest分析并計(jì)算覆蓋率

3、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參考

（1）國(guó)際通用覆蓋率參考值 ≥70%

（2）若小于60%，建議優(yōu)化免疫原或更換抗體來(lái)源

四、影響mAb覆蓋率驗(yàn)證準(zhǔn)確性的關(guān)鍵變量

1、抗體批次與免疫原差異

① 同一抗體不同批次間覆蓋能力可能存在差異，需單獨(dú)驗(yàn)證

② 使用更貼近目標(biāo)工藝的免疫原（如實(shí)際HCP提取物）可有效提升覆蓋率

2、電泳分辨率與染色方法

① 使用pH 4–7 IPG膠條提升分辨率

② 銀染或高靈敏Coomassie染色更利于弱表達(dá)蛋白識(shí)別

3、圖譜比對(duì)的主觀(guān)誤差

① 軟件+人工雙重審閱機(jī)制可有效降低識(shí)別偏差

② 點(diǎn)位數(shù)不應(yīng)低于150–200個(gè)，以提升統(tǒng)計(jì)學(xué)代表性

在單克隆抗體產(chǎn)品的CMC研究中，HCP抗體覆蓋率驗(yàn)證并非“可選項(xiàng)"，而是決定ELISA方法科學(xué)性、產(chǎn)品質(zhì)量一致性和注冊(cè)合規(guī)性的“硬指標(biāo)"。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化的2D-Western驗(yàn)證策略與蛋白種類(lèi)識(shí)別技術(shù)，企業(yè)才能真正建立起科學(xué)、可申報(bào)、可追溯的HCP控制體系。百泰派克生物科技已為數(shù)十個(gè)mAb項(xiàng)目成功完成抗體覆蓋率驗(yàn)證與ELISA平臺(tái)搭建，助力客戶(hù)從早研走向臨床、從IND邁向BLA，以更穩(wěn)健的質(zhì)量體系迎接全球市場(chǎng)挑戰(zhàn)。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白zhìzǔxué

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種蛋白zhìzǔxué分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線(xiàn)性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)*，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專(zhuān)有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶(hù)提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶(hù)提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿(mǎn)足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶(hù)的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

單克隆抗體生產(chǎn)中的HCP抗體覆蓋率分析檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹