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LRRK2-IN-1

MCE 國(guó)際站：LRRK2-IN-1

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-10875

CAS：1234480-84-2

純度：99.42%

存儲(chǔ)條件：粉末 -20°C 3 年 4°C 2 年 溶劑中 -80°C 1 年 -20°C 6 個(gè)月

運(yùn)輸條件：美國(guó)大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產(chǎn)品活性：LRRK2-IN-1 是一種有效的，選擇性的 LRRK2 抑制劑，作用于 LRRK2 (G2019S) 和 LRRK2 (WT)，IC50 值分別為 6 nM 和 13 nM。

體外：野生型和 G2019S 轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致 TR-FRET 信號(hào)增加 2.5 倍，LRRK2-IN-1 可以劑量依賴性方式抑制該信號(hào)，IC50 值分別為 0.08 µM 和 0.03 µM[1]。LRRK2-IN-1 抑制 DCLK2 的 IC50 為 45 nM，在 AURKB、CHEK2、MKNK2、MYLK、NUAK1 和 PLK1 的生化測(cè)定中評(píng)估時(shí)，IC50 大于 1 µM。LRRK2-IN-1 被證實(shí)可以抑制 MAPK7，EC50 為 160 nM。 LRRK2-IN-1 誘導(dǎo)劑量依賴性抑制 Ser910 和 Ser935 磷酸化，同時(shí) 14-3-3 與野生型 LRRK2 和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染到 HEK293 細(xì)胞中的 LRRK2[G2019S] 的結(jié)合喪失[2]。LRRK2-IN-1 具有中等細(xì)胞毒性，在 HepG2 細(xì)胞中的 IC50 為 49.3 µM。LRRK2-IN-1 在存在和不存在 S9 的情況下分別在 15.6 和 3.9 µM 時(shí)表現(xiàn)出遺傳毒性[3]。LRRK2-IN-1 抑制增殖、遷移并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，以 HCT116 和 AsPC-1 細(xì)胞凋亡為標(biāo)志[4]。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

體內(nèi)：LRRK2-IN-1（100 mg/kg，腹腔注射）誘導(dǎo)小鼠腎臟中 LRRK2 去磷酸化[2]。瘤周注射 LRRK2-IN-1（100 mg/kg）可顯著減少 AsPC-1 腫瘤異種移植瘤的腫瘤體積和重量[4]。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：將LRRK2-IN-1溶解于Captisol中，以100mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射給野生型雄性C57BL/6小鼠。對(duì)照組小鼠注射等量的Captisol。在1和2小時(shí)時(shí)間點(diǎn)，通過(guò)頸椎脫臼法給小鼠消毒，快速解剖腎臟和腦組織，并在液氮中速凍。MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將細(xì)胞（每孔 104 個(gè)細(xì)胞）接種到 96 孔組織培養(yǎng)板中，重復(fù)三次。在 LRRK2-IN-1 存在下培養(yǎng)細(xì)胞，DMSO 作為載體，濃度分別為 0、0.31、0.63、1、2、5、10 和 20 μM。處理后 48 小時(shí)，向每個(gè)孔中加入 10 μL TACS MTT 試劑，并在 37°C 下孵育細(xì)胞，直到細(xì)胞中出現(xiàn)深色結(jié)晶沉淀。然后將 100 μL 266 mM NH4OH（DMSO 溶液）加入孔中，并放置在低速搖板上 1 分鐘。搖動(dòng)后，將板避光孵育 10 分鐘，然后使用微孔板讀數(shù)器讀取每個(gè)孔的 OD550。結(jié)果取平均值，計(jì)算為 DMSO（載體）對(duì)照 +/- 平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差的百分比。MCE 尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

激酶實(shí)驗(yàn)：在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)?cDNA 構(gòu)建體 36 小時(shí)后，用谷胱甘肽瓊脂糖從 HEK293 細(xì)胞裂解物中純化活性 GST-LRRK2 (1326-2527)、GST-LRRK2 [G2019S] (1326-2527)、GST-LRRK2 [A2016T] (1326-2527) 和 GST-LRRK2 [A2016T+G2019S] (1326-2527) 酶。肽激酶測(cè)定重復(fù)進(jìn)行，總體積為 40 µL，含有 0.5 µg LRRK2 激酶（純度約為 10%，最終濃度為 8 nM），溶于 50 mM Tris/HCl，pH 7.5，0.1 mM EGTA，10 mM MgCl2，20 µM Nictide，0.1 µM [γ-32P]ATP（500 cpm/pmol）和指定濃度的抑制劑（溶于 DMSO）。在 30°C 下孵育 15 分鐘后，將 35 µL 反應(yīng)混合物滴到 P81 磷酸纖維素紙上并浸入 50 mM 磷酸中以終止反應(yīng)。徹-底清洗樣品，并通過(guò) Cerenkov 計(jì)數(shù)對(duì) [γ-32P]ATP 摻入 Nictide 進(jìn)行量化。 IC50 值是使用 GraphPad Prism 的非線性回歸分析計(jì)算得出的。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

IC50 & Target：13 nM (WT), 6 nM (G2019S)

銷售產(chǎn)品：Clobetasol propionate  | Zanidatamab  | GSK-1070916  | Nordihydroguaiaretic acid  | IL-10, Pig  | Moxifloxacin  | (-)-Epicatechin  | PNPP (disodium)  | Ginsenoside Rd  | LCS-1

Trending products：Recombinant Proteins  |  Natural Products  |  Fluorescent Dye  |  PROTAC  |  Oligonucleotides

參考文獻(xiàn)：

[1]. Hermanson SB, et al. Screening for Novel LRRK2 Inhibitors Using a High-Throughput TR-FRET Cellular Assay for LRRK2 Ser935 Phosphorylation.PLoS One. 2012;7(8):e43580. Epub 2012 Aug 28.
[2]. Deng, Xianming., et al. Characterization of a selective inhibitor of the Parkinson's disease kinase LRRK2. Nature Chemical Biology (2011), 7(4), 203-205.
[3]. Koshibu K, et al. Alternative to LRRK2-IN-1 for Pharmacological Studies of Parkinson's Disease. Pharmacology. 2015;96(5-6):240-7.
[4]. Weygant N, et al. Small molecule kinase inhibitor LRRK2-IN-1 demonstrates potent activity against colorectal and pancreatic cancer through inhibition of doublecortin-like kinase 1. Mol Cancer. 2014 May 6;13:103.