圖1 阿莫西林結(jié)構(gòu)式（MW 365.4）

Chromai二維液相色譜系統(tǒng)（雙三元泵P60、自動進樣器A10C、標(biāo)配兩個二位六通閥柱溫箱C10V2、紫外檢測器D10）

Chromai三重四級桿質(zhì)譜儀（TQ5000）

圖2 Chromai液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（TQ5000）

一維色譜柱：Lotus ACC4  4.6×250 mm, 5 μm

二維色譜柱：Lotus AQ-C18  4.6×250 mm, 5 μm

一維流動相A：[0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（2 mol/L氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH 至 5.0）]：乙腈=99：1

一維流動相B：[0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（2 mol/L 氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH 至 5.0）]：乙腈=80：20

二維流動相A：0.1%甲酸水

二維流動相B：乙腈

柱溫：35 ?C

流速：1.0 mL/min

Loop環(huán)體積：1000 µL

進樣體積：50 µL                                        

檢測波長：254 nm

電離源：ESI源

掃描模式：

 Q1全掃描：正離子模式，m/z: 200-1200

                  負(fù)離子模式，m/z: 80-500

 子離子掃描：m/z: 100-400，標(biāo)準(zhǔn)分辨率，CE 10 V，CAD 8  

離子源溫度：550 ℃

輔助加熱氣：50 psi

霧化氣：40 psi

氣簾氣：40 psi

稱取阿莫西林20.0 mg，加入一維流動相A超聲溶解并定容至10.0 mL，0.22 μm微孔濾膜過濾，待分析。

阿莫西林雜質(zhì)在一維及二維色譜的保留時間見表1，分析時將一維色譜中目標(biāo)峰收集到Loop環(huán)中，再次切閥把目標(biāo)峰轉(zhuǎn)移至二維色譜柱中，0-10min切至廢液實現(xiàn)在線脫鹽，10.1min開始切入質(zhì)譜進行定性分析（見圖3）。

表1 二維液相保留時間和柱溫箱六通閥切閥時間

圖3 二維液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用示意圖

如圖4所示，一維色譜圖中1、2、4、5、6、7、8、9、10、11、12號峰為雜質(zhì)峰，3號峰為阿莫西林主成分。

圖4 二維液相色譜中一維色譜圖

雜質(zhì)在質(zhì)譜上的母離子與特征碎片離子分別如下圖所示，根據(jù)碎片離子與參考文獻，可初步推測鑒定阿莫西林中各雜質(zhì)成分。

圖5 各編號雜質(zhì)峰提取離子流圖（提取偏差0.5）

表2 各編號雜質(zhì)峰全掃描與子離子掃描結(jié)果匯總

根據(jù)表2結(jié)果，通過與文獻對比，推測如下：2號峰雜質(zhì)可能為amoxicilloic acid (5S,6R)或amoxicilloic acid (5R,6R) [1, 2]；5號峰與6號峰具有一致的質(zhì)譜碎片，應(yīng)互為同分異構(gòu)體，可能為amoxilloic acid (5S)或amoxilloic acid (5R) [1, 2]；7號峰與阿莫西林主成分具有一致的質(zhì)荷比，應(yīng)互為同分異構(gòu)體，可能為L-amoxicillin, amoxicillin (5R) piperazine-2′,5′-dione或amoxicillin (5S) piperazine-2′,5′-dione [1, 2]；8號峰與9號峰具有一致的質(zhì)荷比，且質(zhì)譜碎片基本一致，推測該雜質(zhì)為阿莫西林二聚體[2]。

本方案使用科諾美特色的雙三元泵，采用在線柱切換二維液相與質(zhì)譜聯(lián)用的方式，可以對一維色譜分析洗脫出來的目標(biāo)化合物，通過閥切換轉(zhuǎn)移至Loop環(huán)，然后通過另一個泵把Loop環(huán)中的洗脫液轉(zhuǎn)移至二維色譜柱上，實現(xiàn)在線脫鹽后，立即進行質(zhì)譜分析。該方法可以快速地對阿莫西林中6 個微量目標(biāo)雜質(zhì)進行定性分析，并通過二級質(zhì)譜的裂解分析，實現(xiàn)相關(guān)的結(jié)構(gòu)鑒定，為阿莫西林原料藥進行質(zhì)量控制提供參考。

參考文獻

[1]N?GELE E, MORITZ R. Structure elucidation of degradation products of the antibiotic amoxicillin with ion trap MS

and accurate mass determination by ESI TOF [J]. J Am Soc Mass Spectr, 2005, 16(10): 1670-6.

[2]VALVO L, CIRANNI E, ALIMENTI R, et al. Development of a simple liquid chromatographic method with UV and mass spectrometric detection for the separation of substances related to amoxicillin sodium [J]. J Chromatogr A, 1998, 797(1-2): 311-6.