百歐博偉生物：貼壁細(xì)胞需要用到一種特定的試劑——蛋白酶，其作用是切斷細(xì)胞和容器之間，細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互粘連，用蛋白酶處理細(xì)胞的過程叫做「消化」，「消化」之后的下?lián)軙纬蓡渭?xì)胞并從容器底部掉下來。常用的蛋白酶是胰蛋白酶。

一、材料準(zhǔn)備：

1、預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱；

2、用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手；

3、正確擺放使用的器械：保，證足夠的操作空間，不僅便于操作而且減少污染；

4、點(diǎn)燃酒精燈：注意火焰不能太小。

二、傳代流程：

1、取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。

2、從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意培養(yǎng)瓶取出細(xì)胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細(xì)胞。

3、將培養(yǎng)瓶放入超凈工作臺后打開瓶口，同時要在酒精燈上燒口消毒。

4、加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞較好好，消化溫度是37℃。

5、顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時細(xì)胞消化適度。

6、棄去胰蛋白酶液，加入新鮮的培養(yǎng)液終止反應(yīng)。小心吹打成細(xì)胞懸液。

7、將細(xì)胞懸液吸入10 ml離心管中。平衡后將離心管放入離心機(jī)中，以1000 rpm/min離心5 min。

8、棄去上清液，加入適當(dāng)體積的培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。

9、將細(xì)胞懸液吸出分裝至2-3個培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。

10、顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要時計(jì)數(shù)。注意密度過小會影響傳代細(xì)胞的生長，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml。，后要做好標(biāo)記。

11、繼續(xù)培養(yǎng)：用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細(xì)胞2-4 h后開始貼附在瓶壁上。

北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務(wù),是中國微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！