ELISA包被的核心原理是利用抗原或抗體通過物理吸附(疏水作用)或化學(xué)共價鍵固定在固相載體(如聚苯乙烯酶標(biāo)板)表面,形成穩(wěn)定的固相免疫檢測平臺?
。
?物理吸附?是主要方式,依賴蛋白質(zhì)分子疏水基團與載體表面疏水基團間的非特異性結(jié)合,其效果受蛋白質(zhì)分子量、等電點、濃度等影響?
。對于難以吸附的小分子抗原(如半抗原、短肽)或脂類物質(zhì),常需通過間接包被(如與載體蛋白結(jié)合)或特殊處理(如有機溶劑溶解后干燥)來實現(xiàn)固定?
。
包被質(zhì)量直接影響實驗效果,需嚴(yán)格控制包被緩沖液pH(如pH9.6的CBS)、抗原濃度(如5μg/ml)及孵育條件(室溫/4℃/37℃過夜)?
。高質(zhì)量的包被能確保后續(xù)抗原抗體反應(yīng)的特異性和信號檢測的準(zhǔn)確性。
注:以上僅供參考!
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